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日本同仁化學(xué)CCK-8試劑盒 Cell Counting Kit-8(CCK-8試劑盒)是由同仁化學(xué)研究所(Dojindo)開發(fā)的檢測細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性的試劑盒,為MTT法的替代方法,試劑盒中采用自己開發(fā)的水溶性四唑鹽-WST-8,在美國,歐洲等國家地區(qū)均持有證書,同仁化學(xué)研究所于2006年在中國獲得了WST的注冊商標(biāo)。
CCK-8法與普通的MTT法相比,具有顯著特點(diǎn):
★靈敏度高,數(shù)據(jù)可靠,重現(xiàn)性好
★操作簡便,省時(shí)省力
★水溶性,不需要換液,尤其適合于懸浮細(xì)胞
★無需放射性同位素和有機(jī)溶劑,對細(xì)胞毒性低
★為1瓶溶液,毋需預(yù)制,即開即用
★適合于高通量藥物篩選
CCK-8用途:藥物篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗(yàn)
CCK-8試劑盒在國內(nèi)科研院所、重點(diǎn)大學(xué)、*醫(yī)院被廣泛應(yīng)用,認(rèn)可度高,使用CCK-8發(fā)表的中外文獻(xiàn)達(dá)600多篇,其中截止08年底SCI影響因子IF>10分的論文有37篇,高IF38.5分
[Heterozygosity with respect to Zfp148 causes complete loss of fetal germ cells during mouse embryogenesis,Nature Genetics33, 172 - 176 (01 Feb 2003)]
CCK-8試劑與MTT等方法靈敏度比較
CCK-8試劑毒性:CCK-8和其他檢測方法對比可以得出——CCK-8對細(xì)胞幾乎無毒性,不傷害細(xì)胞,細(xì)胞可重復(fù)利用
CCK-8 P公司產(chǎn)品 R公司產(chǎn)品
(操作說明請參考中英文說明書或來電/在線咨詢)
CCK-8 試劑盒利用了同仁化學(xué)研究所(Dojindo)開發(fā)的四唑鹽——WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽),它在電子載體1-Methoxy PMS存在的情況下能夠被還原成水溶性的甲臜染料。CCK-8溶液可以直接加入到細(xì)胞樣品中;不需要預(yù)配各種成分。CCK-8法是用于測定細(xì)胞增殖或細(xì)胞毒性試驗(yàn)中活細(xì)胞數(shù)目的一種高靈敏度,無放射性的比色檢測法。CCK-8被細(xì)胞內(nèi)脫氫酶生物還原后生成的橙色甲臜染料能夠溶解在組織培養(yǎng)基中,生成的甲臜量與活細(xì)胞數(shù)量成正比。WST-8法檢測細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)的靈敏度比其它四唑鹽如MTT, XTT, MTS或WST-1高。由于CCK-8溶液相當(dāng)穩(wěn)定,并且對細(xì)胞沒有毒性,因此可以長時(shí)間孵育。日本同仁化學(xué)CCK-8試劑盒
CCK-8 檢測步驟
1. 向各孔中加入100 μl細(xì)胞懸液。a)
2. 在37℃下預(yù)孵育培養(yǎng)板。b)
3. 向各孔中加入各濃度的待測溶液c)10 μl。
4. 37℃下孵育。
5. 向各孔中加入10 μl的CCK-8溶液d)。
6. 37℃下孵育1-4小時(shí)。e)
7. 測定450 nm處的OD值。
a) 使用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基制備50,000-100,000個(gè)/ml的細(xì)胞懸液。
b) 建議使用CO2培養(yǎng)箱過夜預(yù)培養(yǎng)。
c) 使用培養(yǎng)基或PBS來制備溶液。
d) 如果待測溶液有還原性,測定不含細(xì)胞,但含有CCK-8的待測溶液在450 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入CCK-8 ,如果吸光度相對較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的100 μl培養(yǎng)基和10 μl CCK-8進(jìn)行檢測。
e) 白細(xì)胞可能需要培養(yǎng)較長時(shí)間。
活力計(jì)算
細(xì)胞活力*(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[A(0加藥)-A(空白)] ×100
A(加藥):具有細(xì)胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A(空白):具有培養(yǎng)基和CCK-8溶液而沒有細(xì)胞的孔的吸光度
A(0加藥):具有細(xì)胞、CCK-8溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
*細(xì)胞活力:細(xì)胞增殖活力或細(xì)胞毒性活力
中文說明書下載
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