您好, 歡迎來(lái)到化工儀器網(wǎng)! 登錄| 免費(fèi)注冊(cè)| 產(chǎn)品展廳| 收藏商鋪|
當(dāng)前位置:蘇州千舍生物科技有限公司> 供求商機(jī)> 豬腎細(xì)胞系 PK-13
豬腎細(xì)胞系 PK-13
DMEM+10%FBS+1%P/S
貼壁生長(zhǎng)
細(xì)胞培養(yǎng)基本知識(shí)
體內(nèi)組織細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí),所需培養(yǎng)環(huán)境基本相似,但由于物種、個(gè)體遺傳背 景及所處發(fā)育階段等的不同,各自要求條件有一定差別,所采取的培養(yǎng)技術(shù)措施 亦不盡相同,現(xiàn)介紹個(gè)別組織細(xì)胞培養(yǎng)的要點(diǎn)如下:
上皮細(xì)胞培養(yǎng)
視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞
上皮細(xì)胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分,又由于癌起源于上皮組織,故上皮細(xì)胞培養(yǎng)特別受到重視。但上皮細(xì)胞培養(yǎng)中常混雜有成纖維細(xì)胞,培養(yǎng)時(shí)生長(zhǎng)速度往往超過上皮細(xì)胞,并難以純化,同時(shí)上皮細(xì)胞難以在體外長(zhǎng)期生存,因此純化和延長(zhǎng)生存時(shí)間是培養(yǎng)關(guān)鍵。體內(nèi)上皮細(xì)胞生長(zhǎng)在膠原構(gòu)成的基膜, 因此培養(yǎng)在有膠原的底物上可能利于生長(zhǎng), 另外人或小鼠表皮細(xì)胞培養(yǎng)在以 3T3 細(xì)胞為飼養(yǎng)層(用射線照射后)時(shí),細(xì)胞易生長(zhǎng)并可發(fā)生一定程度的分化現(xiàn)象。降低 PH、Ca2+含量和溫度,向培養(yǎng)基中加入表皮生長(zhǎng)因子,均有利于表皮細(xì)胞生長(zhǎng)。以表皮細(xì)胞為例, 用皮膚表皮和真皮分離培養(yǎng)法可獲得純上皮細(xì)胞, 其法如下:
1、 取材:外科植皮或手術(shù)殘余皮膚小塊, 早產(chǎn)流產(chǎn)兒皮膚更好, 取角化層薄者, 切成 0.5-1 平方厘米小塊。
2、置 0.02%EDTA 中,室溫,5 分鐘。
3、換入 0.25%胰蛋白酶中,4℃過夜。
4、分離:取出皮塊,用血管或鑷子將表皮與真皮層分開。
5、取出表皮,剪成更小的塊后,置 0.25%胰酶中,37℃,30—60 分鐘。
6、反復(fù)吹打,制成懸液。
7、培養(yǎng):用 80 目不銹鋼紗網(wǎng)濾過后,低速離心,吸去上清。
8、直接加入培養(yǎng)基(Eagle 加 20%小牛血清)制成細(xì)胞懸液,接種入培養(yǎng)瓶,CO2 溫箱培養(yǎng)。
內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)
人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞
內(nèi)皮細(xì)胞易于從大血管分離培養(yǎng)成單層細(xì)胞,對(duì)于研究?jī)?nèi)皮細(xì)胞再生、腫瘤促血管生長(zhǎng)因子(TAF)等有很大價(jià)值。研究人內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)以人臍帶靜脈灌流消化法最為簡(jiǎn)便,其法如下:
1、產(chǎn)后新鮮臍帶,無(wú)菌剪取 10—15 厘米長(zhǎng)一段,如不能立即培養(yǎng),可于 12 小 時(shí)內(nèi)保存于 4℃。
2、用三通注射器吸取溫 PBS 液注入臍靜脈中洗去殘血,在入口處用線繩扎緊, 以防液體返流。
3、用血管緊臍帶一端,從另一端向臍靜脈中徐徐注入終濃度為 0.1%的粗制膠原酶,充滿血管,消化 3—10 分鐘;注入口用線繩扎,以防液體返流。
4、吸出含有內(nèi)皮細(xì)胞的消化液,于離心管中,注入溫 PBS 輕輕反復(fù)沖洗后,一 并注入離心管中(此步驟可重復(fù)) 。
5、離心去上清,加入RPMI1640培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液,接種入培養(yǎng)器皿中,置溫 箱培養(yǎng)。兩至三天可見細(xì)胞長(zhǎng)成單層。
神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)
神經(jīng)元與神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞
神經(jīng)細(xì)胞(神經(jīng)元)不易培養(yǎng),只有在適宜情況下,如接種在膠原底層上,或加入神經(jīng)生長(zhǎng)因子和膠質(zhì)細(xì)胞因子時(shí),可出現(xiàn)一定程度的分化,長(zhǎng)出突起等現(xiàn)象, 但很難使之增殖。而神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞是神經(jīng)組織中比較容易培養(yǎng)的成分。人、鼠等腦組織即可用于神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng),不僅能獲得生長(zhǎng)的膠質(zhì)細(xì)胞,也可形成能傳代的二倍體細(xì)胞系。一般說(shuō)來(lái),膠質(zhì)細(xì)胞在培養(yǎng)中生長(zhǎng)不穩(wěn)定,不易自發(fā)轉(zhuǎn)化,但對(duì)外界因素仍保持很好的敏感性,可用 ROUS病毒和SV4等誘發(fā)轉(zhuǎn)化。
一.設(shè)備:無(wú)菌操作設(shè)備。
二.大型設(shè)備
CO2培養(yǎng)箱:恒溫5%、10%CO2維持培養(yǎng)液中pH值。
倒置顯微鏡:用于每天觀察貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)情況。
解剖顯微鏡:用于準(zhǔn)確地取材。
常溫冰箱:-4℃,用于保存各種培養(yǎng)液,解剖液和鼠尾膠。
低溫冰箱:-20℃--80℃,用于儲(chǔ)存血清酶,貴重物品和試劑。
電熱干烤箱:用于消毒玻璃器皿。高壓消毒鍋:用于消毒培養(yǎng)皿,手術(shù)器械。
過濾器:配制解剖液、培養(yǎng)液,必須過濾后才可使用,以去除細(xì)菌。
滲透壓儀:pH劑,天平等。
三.培養(yǎng)器皿及手術(shù)器械
1.培養(yǎng)皿:常用35mm塑料及玻璃皿,解剖取材用15mm-90mm直徑。
2.培養(yǎng)板:24-40孔,可用于開放培養(yǎng)。
3.培養(yǎng)瓶;
4.吸管:常用1,5,10mL,均需泡酸、洗滌、滅菌后方可使用。
5.各類培養(yǎng)液貯存器。
6.小型手術(shù)器械。
準(zhǔn)備
一.配制培養(yǎng)液
(1)解剖液:以無(wú)機(jī)鹽(去除Ca2+, Mg2+ )加葡萄糖配制成PBS緩沖液,保持一定的滲透壓和pH值。
(2)基礎(chǔ)培養(yǎng)基(MEM):主要為多種氨基酸,加入葡萄糖,雙蒸餾水溶解。
(3)接種培養(yǎng)液:用于胰酶消化后的細(xì)胞分散,做成細(xì)胞懸液,其成分為MEM含1%谷氨酰胺,另加入10%馬血清,當(dāng)天配制。
(4)維持培養(yǎng)液:接種后24h,全部換成此液,后每2周換一次,每次換1/2。其成分為MEM中含5%馬血清,1%谷氨酰胺,及適量的支持性營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。
二.培養(yǎng)基質(zhì)
常用鼠尾膠、小牛皮膠,多聚賴氨酸,再涂膠。
三.消毒培養(yǎng)皿的備用
所有培養(yǎng)器皿均需清水沖洗2-3d,達(dá)兩次ddH2O,每遍洗刷3-4次,加塞包裝,置于烤箱中干燥消毒,于培養(yǎng)前1天進(jìn)行。
神經(jīng)細(xì)胞分散培養(yǎng)
(一)選材
常用胚胎動(dòng)物或新生鼠神經(jīng)組織。雞胚常用胚齡6-8d,新生鼠或胎鼠(12-14d)或人胚胎。不過也有認(rèn)為與組織相關(guān)。如大白鼠胚胎以19d為宜,小鼠以18d為宜,大鼠紋狀體以10d為宜;若紋狀體與黑質(zhì)聯(lián)合培養(yǎng)的大鼠胚,則黑質(zhì)以13d,紋狀體18-21d為宜;小腦以20-21d小鼠胚胎,所獲蒲氏細(xì)胞成活率高,顆粒細(xì)胞正在分化;脊髓與DRG聯(lián)合培養(yǎng),常用4-7d雞胚或12-14d小鼠胚胎,取材易,神經(jīng)成活率高。
(二)取材
腦則取出相應(yīng)組織,在解剖液中先剪碎,以使胰酶消化。脊髓則固定于瓊脂板上,用小刀將其要成背腹兩側(cè),分別培養(yǎng)。
(三)細(xì)胞分離與接種
神經(jīng)組織用0.125-0.25%胰蛋白酶在37℃孵育30min,移入接種液,停止消化,并洗去胰蛋白酶液,用細(xì)口吸管吹打細(xì)胞懸液,使其充分分散,如此多次,待沉淀后吸出上層細(xì)胞懸液,計(jì)數(shù),預(yù)置細(xì)胞密度,接種于培養(yǎng)皿(1×106),做電生理應(yīng)為5×105或更低。
(四)抑制膠質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)
培養(yǎng)3-5d后,也有人認(rèn)為培養(yǎng)7d后,用阿糖胞苷,或5-FU抑制神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的生長(zhǎng)
肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞
II型肺泡上皮細(xì)胞
氣管上皮細(xì)胞
氣管平滑肌細(xì)胞
支氣管上皮細(xì)胞
支氣管平滑肌細(xì)胞
肺成纖維細(xì)胞
肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞
肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞
心肌細(xì)胞
主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞
心肌成纖維細(xì)胞
心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞
主動(dòng)脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞
冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞
冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞
頸動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞
頸動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞
食管上皮細(xì)胞
食管平滑肌細(xì)胞
食管成纖維細(xì)胞
胃粘膜上皮細(xì)胞
胃平滑肌細(xì)胞
胃成纖維細(xì)胞
小腸粘膜上皮細(xì)胞
小腸平滑肌細(xì)胞
小腸成纖維細(xì)胞
結(jié)腸粘膜上皮細(xì)胞
結(jié)腸平滑肌細(xì)胞
結(jié)腸成纖維細(xì)胞
膽囊上皮(永生化)細(xì)胞
膽囊上皮細(xì)胞
肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞
肝外膽管上皮細(xì)胞
肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞
肝星狀細(xì)胞
肝竇內(nèi)皮細(xì)胞
肝Kuffer細(xì)胞
直腸成纖維細(xì)胞
肝成纖維細(xì)胞
直腸上皮細(xì)胞
直腸平滑肌細(xì)胞
膽囊微血管內(nèi)皮細(xì)胞
膽囊成纖維細(xì)胞
膽囊平滑肌細(xì)胞
膽囊動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞
食管癌細(xì)胞
食管纖維瘤細(xì)胞
腎小管上皮細(xì)胞
腎小球系膜細(xì)胞
腎小球內(nèi)皮細(xì)胞
腎足細(xì)胞
輸尿管上皮細(xì)胞
輸尿管平滑肌細(xì)胞
膀胱上皮細(xì)胞
膀胱平滑肌細(xì)胞
膀胱成纖維細(xì)胞
前列腺上皮細(xì)胞
前列腺成纖維細(xì)胞
輸卵管成纖維細(xì)胞
甲狀腺上皮細(xì)胞
甲狀腺成纖維細(xì)胞
胰腺星狀細(xì)胞
胰島細(xì)胞
腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞
腎上腺包膜成纖維細(xì)胞
扁桃體動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞
扁桃體動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞
腮腺腫瘤細(xì)胞
扁桃體間質(zhì)細(xì)胞
頜下腺囊腫細(xì)胞
甲狀腺微血管內(nèi)皮細(xì)胞
扁桃體上皮細(xì)胞
扁桃體靜脈平滑肌細(xì)胞
扁桃體成纖維細(xì)胞
卵巢間質(zhì)細(xì)胞
輸卵管上皮細(xì)胞
輸卵管平滑肌細(xì)胞
子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞
子宮平滑肌細(xì)胞
乳腺上皮細(xì)胞
乳腺成纖維細(xì)胞
乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞
乳腺癌(腫瘤)細(xì)胞
子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞
子宮瘤細(xì)胞
乳腺癌(腫瘤)干細(xì)胞
宮頸成纖維細(xì)胞
宮頸平滑肌細(xì)胞
卵巢囊腫細(xì)胞
宮頸上皮細(xì)胞
精原細(xì)胞
睪丸白膜上皮細(xì)胞
睪丸白膜成纖維細(xì)胞
輸精管平滑肌細(xì)胞
附睪平滑肌細(xì)胞
附睪管上皮細(xì)胞
附睪成纖維細(xì)胞
宮頸癌細(xì)胞
睪丸支持細(xì)胞
子宮成纖維細(xì)胞
真皮成纖維細(xì)胞
角質(zhì)形成細(xì)胞
前脂肪細(xì)胞
脂肪微血管內(nèi)皮細(xì)胞
真皮毛乳頭細(xì)胞
豬腎細(xì)胞系 PK-13
巨噬細(xì)胞屬免疫細(xì)胞,有多種功能,是研究細(xì)胞吞噬、細(xì)胞免疫和分子免疫學(xué)的 重要對(duì)象。巨噬細(xì)胞容易獲得,便于培養(yǎng),并可進(jìn)行純化。巨噬細(xì)胞屬不繁殖細(xì) 胞群,在條件適宜下可生活 2-3 周,多用做原代培養(yǎng),難以長(zhǎng)期生存。
巨噬細(xì)胞也建有無(wú)限細(xì)胞系,大多來(lái)自小鼠,如 P331、S774A.1、RAW309Cr.l 等,均獲惡性,培養(yǎng)中呈巨噬細(xì)胞形態(tài)和吞噬功能,易于傳代和瓶壁分離,但難 以建株。
培養(yǎng)巨噬細(xì)胞可用各樣方法和各種來(lái)源來(lái)獲取細(xì)胞, 以小鼠腹腔取材法最為實(shí)用, 其法如下:1、實(shí)驗(yàn)前三天,向小鼠腹腔內(nèi)注入無(wú)菌硫羥乙酸肉湯 lml(勿注入腸內(nèi)!,以 ) 刺流產(chǎn)生大量的巨噬細(xì)胞。
2、引頸處死小鼠。
3、手提鼠尾將其全浸入 70%乙醇中 3-5 秒。
4、置動(dòng)物于解剖臺(tái),用針頭固定四肢,持鑷撕開腹部皮膚,但勿傷及腹膜壁, 把皮膚拉向上下兩側(cè),暴露出腹膜壁。
5、用 70%酒精擦洗腹膜壁,注射器吸 10ml Eagle 液注入腹腔中,同時(shí)用手指從 兩側(cè)壓揉腹膜壁,使液體在腹腔內(nèi)流動(dòng)。
6、 用針頭輕挑起腹壁并微傾向一側(cè). 使腹腔中液體集中于針頭下吸取入針管內(nèi)。
7、小心拔出針頭,把液體注入離心管。
8、4℃下 250g 離心 10 分鐘后,去上清,加 10ml Eagle 培養(yǎng)基。
9、計(jì)數(shù)細(xì)胞。每只鼠可產(chǎn)生 20 一 30×106 細(xì)胞,其中 90%為巨噬細(xì)胞。
10、以 3×105 個(gè)貼附細(xì)胞/平方厘米接種。
11、接種數(shù)小時(shí)后,除去培養(yǎng)液,可去除其它白細(xì)胞,純化培養(yǎng)細(xì)胞,用 Eagle 液沖洗 1 一 2 次,再加新 Eagle 培養(yǎng)液置 CO2 溫箱中。
請(qǐng)輸入賬號(hào)
請(qǐng)輸入密碼
請(qǐng)輸驗(yàn)證碼
以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé),化工儀器網(wǎng)對(duì)此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。
溫馨提示:為規(guī)避購(gòu)買風(fēng)險(xiǎn),建議您在購(gòu)買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。