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你知道么？大腸桿菌的7種檢測方法!
閱讀：3546 發布時間：2020-6-12
大腸桿菌是人和許多動物腸道中主要且數量多的一種細菌，主要寄生在大腸內。
那怎么檢測大腸桿菌呢？又該怎么消滅它呢？
下面概述了7種大腸桿菌檢測的新方法。
分割線幾何形
1、氣相色譜(GC)和高效液相色譜法(HPLC)
氣相色譜法主要是將大腸桿菌經過一系列衍生化的前處理后，為接下來的分析研究提供盡可能多的化學組分。大腸桿菌的污染程度可以用頂空氣相色譜法來分析，其原理是利用食品密封系統頂部的微生物代謝產物CO2對微生物進行分析。這種方法對食品質量安全檢測有重大意義。與上述傳統技術相比，此種方法具有檢測速度快、靈敏度高的優點。
高效液相色譜法(HPLC)主要是根據離子配對反相層析的原理來分析核酸。HPLC主要是針對DNA片段分離。長鏈DNA所攜帶的磷酸基團比較多，因此會有更多的TEAA與之相融合，其在柱內停留的時間增加。因為乙腈具有親水性，可以通過其而將DNA分離，在具備一定的變性溫度下，可以通過圖譜顯示明顯的吸收峰。該技術具有準確度高、靈敏度高、成本低等優點，可大大提高工作效率。
2、ATP生物發光技術
ATP生物發光技術是近些年來發展較快的微生物快速檢測方法。ATP是活細胞中普遍的能量代謝產物，為細胞提供各種生理活動所需的能量，而且其在生物體內含量維持在一定的范圍內。ATP含量檢測的一種方法是熒光光度法，生物發光是活細胞在熒光素酶催化下發出的熒光。目前使用的熒光素酶主要來源于北美的螢火蟲，相對分子質量為62000的蛋白質，它可以催化熒光素的氧化反應，這種反應的終產物不穩定，很快分解產生熒光。與傳統檢測方法相比，不同之處在于幾分鐘內便可獲得檢測結果，而且熒光光度計是便攜式的，使用非常方便，適用于現場檢測，這種技術可以用于檢測微小的污染物水平以及食品加工設備及其表面的清潔程度的檢測。
3、PCR檢測技術
聚合酶鏈反應技術即PCR(polymerasechainreaction)，該技術是在1971年首先被Kleppe等提出，1985年才作為一種檢測方法獲得認可。PCR檢測技術是一種聚合酶鏈反應，其采用變性―退火―延伸三個步驟使DNA基因能夠在體外實現解旋解鏈，類似于一種體外增加、復制形式。理論上可在2h內將一個DNA分子擴增到106～109倍，采用瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR擴增產物的熒光條帶。
目前PCR技術廣泛用于生命科學的許多學科中。在食品微生物檢測領域，PCR可用于快速檢測食品中的微生物含量。常用的主要有免疫PCR、實時熒光定量PCR、多重PCR、反轉錄PCR和實時定量PCR等。史云等建立了用于肉及肉制品中大腸桿菌的兩重PCR檢測方法，但該方法需要較長的時間的樣品純化處理，且對操作人員的專業知識的要求也較高。
4、生物傳感器檢測技術
生物傳感器主要是以生物化學傳感技術為基礎，用抗體、酶、細胞等作為識別元件，并與信號轉換器和電子測量儀聯合構成的一種分析工具。目前已經成熟的商品化的傳感器有免疫傳感器、酶傳感器、DNA雜交傳感器、微生物傳感器、分子印跡傳感器等。生物傳感器具有諸多優點，如高靈敏度、高選擇性、較好的穩定性、低成本、且能在復雜的體系中快速在線監測。
現在用于信號傳導的方法有表面聲波傳導、電氣化學方法和光學傳導法。用于食品微生物檢測的主要是免疫傳感器和基因傳感器，原理是利用DNA雜交和抗原抗體反應進行檢測，再將其轉換為光信號或電信號并通過儀器放大輸出。生物傳感器的分子識別元件的載體可采用多種材料，利用較多的是光纖、熒光光度計等。
殷涌光等人利用抗體免疫吸附反應，采用一次抗體――抗原一二次抗體的夾心法將膠體金復合抗體作為二次抗體大幅度增加質量，并延長膠體金復合抗體與微生物的結合過程，放大和穩定信號，從而顯著提高檢測精度。
5免疫磁珠技術(IMS)
免疫磁珠技術是一種大腸桿菌的分離技術。其原理是以磁珠為抗體載體，磁珠和大腸桿菌結合，通過磁力來實現力學移動進而將大腸桿菌進行分離。與其他的細菌分離方法相比，免疫磁珠技術在很大程度上提高了樣本中病原性副溶血性弧菌的檢測效率。
免疫磁珠技術可以快速地在不同菌種的樣本中處理不同的微生物，該方法可以大幅度地提升檢測效率。
6、自動化儀器
自動免疫測定分析儀誕生于20世紀70年代。隨著科技的發展，自動免疫測定分析儀在各領域的應用也越來越多，該儀器使用簡單，無太多操作干擾，既省時省力，又大大提高了檢測的精確度和靈敏度。
這種自動酶標免疫測試系統目前在國內外是酶免疫自動化系統中應用為廣泛的一種。但是由于與其配套的試劑昂貴，從而限制了其在基層實驗室的使用。
7、基因芯片技術
基因芯片技術(genechip)是20世紀90年代興起的生物技術，也叫DNA微陣列(DNAmi―croarray)。采用原位合成(insitusynthesis)或顯微打印方法，將數以萬計的DNA探針固化在支持物表面，產生二維DNA探針陣列，接著與標記的樣品進行雜交，通過檢測雜交信號來實現對生物樣品快速、并行、高效地檢測，由于它常用硅芯片作為固相支持物，而且制備中運用了計算機芯片的制備技術，所以稱為基因芯片技術。
基因芯片可以對食品中的致病菌實行高通量和平行檢測，一次實驗就可以得出全部檢測結果。另外整個檢測在很短時間內即可得出檢測結果，且敏感性高，特異性強。但是也有一些問題：目前的基因芯片一般都采用熒光標記，因此需要昂貴的芯片制作系統以及激光共聚焦掃描儀，另外操作過程對工作人員要求有很高的專業素質等等。所以基因芯片的制備技術限制其應用而且還需改進。