通過擠壓制備大的單層囊泡 (LUVET)

時間：2024/1/15閱讀：393

通過凍干或蒸發(fā)制備干脂質(zhì)混合物
將擠出機支架/加熱塊放在熱板上。將溫度計插入加熱塊中提供的孔中。打開熱板，并使其達到所需的溫度。讓加熱塊的溫度達到所需值（大約 15 分鐘）。
使用合適的緩沖液水合脂質(zhì)混合物 >30 分鐘。在水合和擠出過程中，脂質(zhì)懸浮液應(yīng)保持在脂質(zhì)的相變溫度以上。為了提高水溶性化合物的截留效率，可以通過將樣品瓶交替放置在干冰浴和溫水浴中，使水合脂質(zhì)懸浮液經(jīng)歷3-5次冷凍/解凍循環(huán)。
一旦樣品全部水合，將樣品裝入其中一支氣密注射器中，并小心地放入微型擠出機的一端。注意：為了減少死體積，請將裝滿緩沖液的注射器穿過擠出機來預(yù)潤濕擠出機部件；丟棄緩沖區(qū)。新注射器可能有緊密的配合部件；為了便于擠出，在將柱塞插入針筒之前，用緩沖劑預(yù)先潤濕注射器針筒和柱塞。
將空的氣密注射器放入微型擠出機的另一端。確保空注射器柱塞設(shè)置為零；當(dāng)脂質(zhì)通過膜擠出時，注射器將自動填充。
在將組裝好的擠出機設(shè)備放入加熱塊之前，檢查加熱塊的溫度。溫度必須低于80℃，否則注射器會損壞。注意：擠出機裝置在插入加熱塊之前必須全部組裝，否則會損壞。
將全部組裝好的擠出機設(shè)備插入擠出機支架。插入六角螺母，使任何兩個相對的頂點落在垂直平面內(nèi)。使用搖臂夾將注射器與加熱塊保持良好的熱接觸。注意：擠出機裝置在插入加熱塊之前必須全部組裝，否則會損壞。
讓脂質(zhì)懸浮液的溫度與加熱塊的溫度平衡（大約 5-10 分鐘）。
輕輕推動已填充注射器的柱塞，直至脂質(zhì)溶液全部轉(zhuǎn)移到備用注射器中。
輕輕推動備用注射器的柱塞，將溶液轉(zhuǎn)移回原來的注射器。
重復(fù)步驟 9 和 10 至少 4 次（總共 10 次穿過膜）。一般來說，通過膜的次數(shù)越多，脂質(zhì)溶液變得越均勻。
最終的擠出物應(yīng)填充備用注射器。這是為了減少被較大顆粒或異物污染的機會。
脂質(zhì)懸浮液應(yīng)開始澄清，產(chǎn)生稍微渾濁的透明溶液。霧度是由于懸浮液中殘留的大顆粒引起的光散射造成的。
最終擠出后，從加熱塊上取下微型擠出機。
從擠出機中取出已填充的注射器，并將脂質(zhì)溶液注入干凈的樣品瓶中。重要提示：取出注射器時，請將注射器直接從擠出機中拉出；以一定角度取出可能會導(dǎo)致注射器破裂。
實驗期間將囊泡制劑儲存在脂質(zhì)的轉(zhuǎn)變溫度以上。不使用時，將囊泡溶液儲存在 4°C 下。不要凍結(jié)。在 4°C 下儲存時，囊泡溶液在水性介質(zhì)中不能穩(wěn)定超過 3-4 天。在較高溫度和 pH 8 下儲存囊泡溶液可能會縮短囊泡懸浮液的壽命。
在使用新的脂質(zhì)制劑之前全部清潔儀器。

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