CEPT是美國國立衛生研究院(NIH)開發的小分子混合物。由4種成分組成,并取其組成成分(Chroman 1、Emricasan、Polyamines、Trans-ISRIB)的開頭字母命名為“CEPT"。研究表明,CEPT可防止人ES/iPS細胞(人多能干細胞:hPSCs)在細胞傳代中的細胞應激和DNA損傷1)。與強效ROCK抑制劑Y-27632相似,可提高細胞傳代和凍存時hPSCs的存活率。此外,與基于hPSCs的胚狀體和類器官形成、單細胞克隆和基因編輯等干細胞研究中所用的現有培養方法相比,CEPT還可改善細胞存活率1,2,3)。FUJIFILM Wako已上線經無菌測試且無需制備的即用型CEPT Cocktail溶液。本產品為經過濾器滅菌的溶液,可直接添加至培養基使用。有助于再生醫療研究。1)Chen, Y. et al. : Nat. Methods, 18(5), 528 (2021).2)Tristan, C.A. et al. : Stem Cell Reports, 16, 3076 (2021).3)Tristan, C.A. et al. : Nat.Protoc., 18, 48 (2022).● 從DNA損傷等細胞應激中保護ES/iPS細胞,維持細胞結構與功能● 已通過內毒素測試以及支原體陰性檢測的CultureSure系列以1/1,000的量添加本品至培養基,充分混合后使用。● 本產品為凍存品(-20°C)。為避免反復凍融,建議根據使用量分裝凍存。● 溶解時可能會出現沉淀,并非產品質量問題,請直接使用。(沉淀于37°C下靜置1~2 h可能會溶解,請避免反復冷凍和加熱。)添加CEPT或Y-27632至含bFGF的StemSure® hPSC Δ培養基,在37°C,5% CO2的條件下培養人iPS細胞201B7株(6孔板 1 well=9.5cm2)。培養經過16 h以后,更換不含CEPT或Y-27632的培養基,每2~3天更換培養基,繼續培養。培養第8天時,確認細胞后,使用4%多聚甲醛固定細胞,ALP染色后,計數細胞集落。添加CEPT或Y-27632至含bFGF的StemSure® hPSC Δ培養基,在37°C,5% CO2的條件下培養人iPS細胞201B7株(96孔板)。培養經過16 h以后,更換不含CEPT或Y-27632的培養基,每2~3天更換培養基,繼續培養。培養第13天時,確認細胞后,使用4%多聚甲醛固定細胞,ALP染色后,計數形成細胞集落的孔數與空孔數。通過所有孔數與細胞集落形成孔數之比,計算細胞集落形成率。細胞接種數少時,添加CEPT的組比添加Y-27632的組形成的細胞集落更多。【培養基】StemSure® hPSC培養基Δ+35 ng/mL bFGFRed:rBC2LCN-635(人iPS細胞膜染色)※ BC2LCN是一種對存在與人ES/iPS細胞的膜表面的糖鏈具有高親和性的重組凝集素添加CEPT時與添加Y-27632時都未觀察到細胞形態的差異,均可確認未分化維持狀態。
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