三色染色是結締組織染色的經典方法，它是顯示組織中纖維的主要方法之一，也是膠原纖維染色的經典技術方法。這種方法的染色原理與陰離子染料分子的大小和組織的滲透性有關：分子的大小是由分子量來反映的，小分子容易穿透結構致密、滲透性低的組織；高分子量只能進入結構松散、滲透性高的組織。Masson三色染色試劑盒染色的膠原纖維、粘液和軟骨呈藍色（如淡綠色溶液為綠色）；細胞質、肌肉、纖維素和神經膠質呈紅色；核為藍紫色。
Masson三色染色試劑盒操作步驟：
1、切片常規脫蠟至水，用制備好的魏格特鐵蘇木素染色5～10min。
2、用酸性乙醇分化液進行分化，用水洗滌。
3、用馬松藍溶液回藍，用水洗滌。
4、用蒸餾水洗滌1分鐘。
5、品紅品紅染色液5~10分鐘。
6、上述操作中，按蒸餾水：弱酸溶液=2：1的比例配制弱酸工作溶液，用弱酸工作溶液洗滌1min。
7、用磷鉬酸溶液洗滌1～2min。
8、用配制好的弱酸工作液洗滌1min。
9、直接在苯胺藍染色液中染色1~2分鐘。
10、用配制好的弱酸工作液洗滌1min。
1、95%乙醇的快速脫水。無水乙醇脫水3次，每次5～10s。
12、二甲苯透明3次，每次1～2min。中性口香糖密封。
Masson三色染色試劑盒注意事項：
1、切片脫蠟應盡可能干凈。固定起著重要作用，使用不同的固色劑可以延長或縮短染色時間。
2、取A1和A2等量混合，即為魏格鐵蘇木素染色液。一般24小時內就會失去染色力。
3、酸性乙醇的分化時間應根據切片的厚度、組織的種類和新舊程度來確定。
4、弱酸溶液可使顏色更清亮。如大量使用，可用0.1～0.3%的醋酸溶液代替。
5、磷鉬酸分化應在顯微鏡下控制，膠原纖維和纖維可分化為淡紅色和紅色。分化時間取決于染色深度，一般為1~2min。
6、Masson藍液也可用Scott藍液或0.1～1%水溶液代替。
