BCA微量蛋白定量試劑盒

產品貨號：34021

產品規格：1000次

產品簡介：

BCA蛋白定量法是目前廣泛使用的蛋白定量方法之一。本產品是基于BCA（Bicinchoninic Acid）法研制而成，實現了對蛋白質進行快速、穩定、靈敏的濃度測定。其原理是在堿性環境下蛋白質 分子中的肽鏈結構能與Cu²⁺絡合生成絡合物，同時將Cu²⁺還原成Cu⁺。BCA試劑可敏感特異地與Cu⁺結合，形成穩定的有顏色的復合物。在562 nm處有高的光吸收值，顏色的深淺與蛋白質濃度成正比，可根據吸收值的大小來測定蛋白質的含量。

本試劑盒專為低蛋白濃度樣品的蛋白定量而設計，可精確測定濃度為0.2-100μg/ml的蛋白溶液，試劑盒的靈敏性高，平行性好，不同種蛋白之間的測量差異極低。每個試劑盒可以檢測1000個樣品。

包裝清單：

操作步驟：

1.蛋白標準品的準備

取適量5mg/ml蛋白標準，用PBS稀釋至終濃度為100μg/ml。例如取10μl 5mg/ml蛋白標準，加入490μl PBS即可配制成100μg/ml蛋白標準。蛋白樣品在什么溶液中，標準品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡便起見，也可以用0.9% NaCl或PBS稀釋標準品。稀釋后的蛋白標準需-20oC長期保存。

2. 工作液配制

根據樣品數量，按1體積試劑C加25體積試劑B，混勻后加26體積試劑A，再次混勻（按照C-B-A的順序加，切勿更改加樣順序）。配制適量BCA工作液，充分混勻。

3. 蛋白濃度測定

a. 將標準品按0、5、10、20、40、60、80、100μl加到96孔板的標準品孔中，加標準品稀   釋液補足到100μl，相當于標準品濃度分別為0、5、10、20、40、60、80、100μg/ml。標準品濃度可根據實際實驗需求更改。

b. 加適當體積樣品到96孔板的樣品孔中。如果樣品不足100μl，需加標準品稀釋液補足到 100μl。請注意記錄樣品體積。

c. 各孔加入100μl工作液，60oC放置60分鐘。

d. 用酶標儀測定A562，或540-595nm之間的其他波長的吸光度。

e. 根據標準品濃度和A562值做出標準曲線，根據標準曲線和使用的樣品體積計算出樣品的蛋白濃度。

常見問題：

    1. 測定標準曲線時發現隨著標準品濃度的增加吸光度或顏色沒有明顯變化。

     可能的原因是樣品中含有嚴重干擾BCA法測定蛋白濃度的物質。

2. 是否每次測定時都需要做標準曲線？

建議每次測定時都做標準曲線。因為BCA法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深，并且顯色反應的速度和溫度有關，所以除非精確控制顯色反應的時間和溫度，否則如需精確測定宜每次都做標準曲線。

注意事項：

    需酶標儀一臺，測定波長為540-595nm之間，562nm最佳。需96孔板。如果沒有酶標儀，也可以使用普通的分光光度計測定，但測定時，需根據比色皿的最小檢測體積，適當加大BCA工作液的用量使不小于最小檢測體積，樣品和標準品的用量可相應按比例放大也可不變。使用分光光度計測定蛋白濃度時，每個試劑盒可以測定的樣品數量可能會顯著減少。?

    如發現樣品稀釋液或裂解液本身就有較高背景，請試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。

    EDTA濃度必須小于10mM，不兼容EGTA。不適用BCA法時，請試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。

    本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。

    為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。