ATPase染色液（鈣鈷法）

產(chǎn)品貨號(hào)：R23245

產(chǎn)品規(guī)格：5×50ml

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

三磷酸腺苷酶( adenosine triphosphatase，ATPase)是一種水解酶，是催化ATP合成的一種酶。三磷酸腺苷酶根據(jù)所用激活劑、抑制劑以及酶定位的不同分為膜性三磷酸腺苷酶、肌球蛋白三磷酸腺苷酶、線粒體三磷酸腺苷酶等。ATPase 能水解三磷酸腺苷為磷酸腺苷和磷酸，此酶只作用于磷酸與磷酸之間的高能鍵，因而釋放大量能量。其催化反應(yīng)如下：

A-P-P-P + H O→A-P-P + H3PO4 +能量

尚寶生物 ATPase染色(鈣鈷法)原理在于三磷酸腺苷酶水解三磷酸腺苷為二磷腺苷和磷酸，磷酸根與鈣離子結(jié)合為磷酸鈣沉淀，再依次被置換為磷酸鈷和硫化鈷，最終產(chǎn)物為黑色硫化鈷沉淀。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1. 蒸餾水

2. 恒溫箱

操作步驟(僅供參考)：

（一）石蠟切片染色

1. 石蠟切片脫蠟后，入蒸餾水。

2. 入鈣鹽溶液中，37℃溫箱5min。

3. 入ATPase孵育液，孵育2～4h。蒸餾水洗1min。

4. 入硝酸鈷溶液5min，入蒸餾水。

5. 入中性福爾馬林，室溫固定2min。流水沖洗2min。

6. 在上述過(guò)程中配制ALP硫化工作液，即取試劑(E)用蒸餾水稀釋50倍, 即為ALP硫化

7. 工作液，即配即用。切片入硫化工作液，孵育 2min。

8. 流水洗10min后，入蒸餾水。

9. 石蠟切片經(jīng)95%乙醇溶液及無(wú)水乙醇脫水。二甲苯透明，樹膠封片。

（二）冰凍切片染色

1. 冰凍切片直接入蒸餾水。

2. 入鈣鹽溶液中，37℃溫箱5min。

3. 入ATPase孵育液，孵育40min。蒸餾水洗1min。

4. 入硝酸鈷溶液5min，入蒸餾水。

5. 入中性福爾馬林，室溫固定2min。流水沖洗2min。

6. 在上述過(guò)程中配制ALP硫化工作液，即取試劑(E)用蒸餾水稀釋50倍, 即為ALP硫化工作液，即配即用。切片入硫化工作液，孵育2min。

7. 流水洗10min后，入蒸餾水。甘油明膠封固。

染色結(jié)果：

酶所在陽(yáng)性部位      黑色硫化鈷沉淀

陰性對(duì)照 (可選) ：

1. 取對(duì)照切片，用試劑(F)- ATPase對(duì)照液 進(jìn)行孵育，并不用ATPase孵育液 孵育的切片進(jìn)行比較。兩者反應(yīng)相同部位可能有非特異性磷酸(單酯)酶存在，兩者不同部位才是ATP酶活性所在。

2. 將切片入80℃蒸餾水10min，再不其他組織切片同時(shí)孵育，結(jié)果應(yīng)為陰性。

注意事項(xiàng)：

1. ALP孵育液、ALP硫化液易失效，最好分成小分儲(chǔ)存，一經(jīng)開(kāi)啟立即使用。

2. ALP硫化液具有腐蝕性和刺激性氣味，應(yīng)小心操作。

3. 對(duì)冰凍切片染色時(shí)，應(yīng)減少切片在室溫暴露的時(shí)間。

有效期：6個(gè)月有效。