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植物過(guò)氧化物酶(POD)檢測(cè)試劑盒(愈創(chuàng)木酚比色法)

時(shí)間:2022/11/21閱讀:287
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植物過(guò)氧化物酶(POD)檢測(cè)試劑盒(愈創(chuàng)木酚比色法)

產(chǎn)品貨號(hào):BA1775

 

產(chǎn)品規(guī)格:50T

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

過(guò)氧化物酶(peroxisomePOD)是以過(guò)氧化氫為電子受體催化底物氧化的酶,主要存在于細(xì)胞的過(guò)氧化物酶體中,以鐵卟啉為輔基,可催化過(guò)氧化氫,氧化酚類和胺類化合物,具有消除過(guò)氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用,該酶屬于細(xì)胞木質(zhì)素合成途徑中間的關(guān)鍵酶,研究該酶可以探討多種生物細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中木質(zhì)素沉積的代謝機(jī)理,為減少水果石細(xì)胞含量提高其品質(zhì)提供依據(jù)。

植物過(guò)氧化物酶(POD)檢測(cè)試劑盒(愈創(chuàng)木酚比色法)檢測(cè)原理是以愈創(chuàng)木酚(又稱2-甲氧基酚)作為底物,在酶促反應(yīng)的最適條件下采用每隔一定時(shí)間測(cè)定產(chǎn)物生成量的方法,于分光光度計(jì)470nm處測(cè)定吸光度,以吸光度變化所需酶量進(jìn)行計(jì)算,該試劑盒主要用于植物組織的裂解液或勻漿液、血清等樣品中內(nèi)源性的過(guò)氧化物酶活性,尤其適用于測(cè)定水果中過(guò)氧化物酶活性。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,不宜用于臨床診斷或其他用途。

 

產(chǎn)品組成:

試劑名稱

50T

保存條件

試劑(A): POD Lysis buffer

250ml

2-8

試劑(B): POD Assay buffer

100ml

2-8℃,避光

試劑(C): POD 氧化劑

4ml

2-8

 

自備材料:

1. 蒸餾水

2. 研缽或勻漿器

3. 離心管

4. 低溫離心機(jī)

5. 水浴鍋或恒溫箱

6. 分光光度計(jì)、比色杯

 

操作步驟:

1. 準(zhǔn)備樣品:

植物樣品:取2g植物組織或水果中層果肉加入4ml預(yù)冷的POD Lysis buffer研磨或勻漿,4℃ 10000g離心15~20min,留取上清液,即為POD粗提液,-20℃凍存,用于過(guò)氧化物酶的測(cè)定。

血漿、血清和尿液樣品:血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測(cè)定,-20℃凍存,用于過(guò)氧化物酶的測(cè)定。

細(xì)胞或組織樣品:取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液,如有必要用POD Lysis buffer進(jìn)行適當(dāng)勻漿,4℃ 10000g離心 15~20min,留取上清液,即為POD粗提液,-20℃凍存,用于過(guò)氧化物酶的測(cè)定。

高活性樣品:如果樣品中含有較高活性的過(guò)氧化物酶,可以使用POD Lysis buffer進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2. 配制POD Assay buffer工作液:取適量的POD氧化劑和POD Assay buffer,按POD氧化劑:POD Assay buffer=114混合,即為POD Assay buffer工作液,即配即用,不宜久置。

3. POD加樣:按照下表設(shè)置對(duì)照管、測(cè)定管,注意:對(duì)照管、測(cè)定管中為同一待測(cè)樣品,但對(duì)照管中為提前加熱煮沸5min的樣品。溶液應(yīng)按照順序依次加入,并注意避免產(chǎn)生氣泡,如果樣品中的POD活性過(guò)高,可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定,樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置2平行管,求平均值。

加入物(ml

對(duì)照管

測(cè)定管

待測(cè)樣品

0.05(提前煮沸5min)

0.05

POD Lysis buffer

1.45

1.45

POD Assay buffer工作液

1

1

4. POD測(cè)定:以對(duì)照管為對(duì)照(調(diào)零),比色杯光徑1.0cm,立即分光光度計(jì)測(cè)定470nm處測(cè)定管的吸光度(記為A測(cè)定 0 )

 

計(jì)算:

POD活性單位的定義:在該實(shí)驗(yàn)條件下,每1min吸光度變化0.01所需酶量為一個(gè)活性單位。

組織樣本 POD(U)={(A測(cè)定1 -A測(cè)定0 )×V T }/(W×V S ×0.01×t)

式中:A測(cè)定1 =孵育3min后測(cè)定管的吸光度

A測(cè)定0 =加入POD Assay buffer工作液后立即測(cè)定管的吸光度

W=組織樣本的重量(g)

V T =提取酶液的總體積(ml)

V S =測(cè)定時(shí)所用酶液體積(ml)

t=反應(yīng)時(shí)間(min)=3

 

液體樣本 POD(U)=(A測(cè)定1 -A測(cè)定0 )/(0.01×t)

式中:A測(cè)定1 =孵育3min后測(cè)定孔的吸光度值

A測(cè)定0 =加入POD Assay buffer工作液后立即測(cè)定的測(cè)定孔吸光度值

t=反應(yīng)時(shí)間(min)=3

 

注意事項(xiàng):

1. 待測(cè)樣品中不能含有酶抑制劑,同時(shí)需避免反復(fù)凍融。

2. POD酶液提取時(shí),注意低溫操作,防止酶活性。

3. 以煮沸的酶液為對(duì)照時(shí),酶要充分失活。

4. POD氧化劑具有一定腐蝕性,請(qǐng)小心操作。

5. POD氧化劑易揮發(fā),請(qǐng)密閉保存,否則檢測(cè)效率下降。

6. 如果沒(méi)有分光光度計(jì),也可以使用普通的酶標(biāo)儀測(cè)定,每次檢測(cè)指標(biāo)不宜過(guò)多,否則操作時(shí)間不一,有可能導(dǎo)致樣本間的差異。

7. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 

有效期: 6個(gè)月有效。常溫運(yùn)輸,4℃保存。

 

 


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