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上海尚寶生物科技有限公司
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總膽固醇(TC)檢測(cè)試劑盒(COD-PAP單試劑微板法)

時(shí)間:2022/12/1閱讀:283
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總膽固醇(TC)檢測(cè)試劑盒(COD-PAP單試劑微板法)

產(chǎn)品貨號(hào):BA1762

 

產(chǎn)品規(guī)格:100T

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

膽固醇(Cholesterol)又稱膽甾醇,是一種環(huán)戊烷多氫菲的衍生物,廣泛存在于動(dòng)物體內(nèi),其中腦、神經(jīng)組織多,在腎、脾、皮膚、肝和膽汁中含量也較高。用酶學(xué)方法測(cè)定總膽固醇(Total CholesterolTC)是生化檢測(cè)中的常用方法,其特點(diǎn)是:1、靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度均高;2、使用溫和的反應(yīng)條件;3、操作簡(jiǎn)便;4、適用于自動(dòng)分析儀。

總膽固醇(TC)檢測(cè)試劑盒(COD-PAP單試劑微板法)又稱膽固醇氧化酶法或膽固醇氧化酶-過氧化物酶偶聯(lián)法等,血液中的膽固醇約1/3為游離膽固醇,2/3為與脂肪酸結(jié)合的膽固醇酯,后者被膽固醇酯酶(CEH)水解為游離膽固醇,游離膽固醇被膽固醇氧化酶(COD)氧化成膽甾烯酮,并產(chǎn)生過氧化氫,再經(jīng)過氧化物酶(POD)催化,使4-氨基安替比林與酚(三者合稱PAP)反應(yīng),生成紅色醌亞胺色素(Trinder反應(yīng)),分光光度計(jì)在500~520nm處進(jìn)行比色測(cè)定。本試劑盒用于人或動(dòng)物的血清、血漿、腦脊液、細(xì)胞、組織等樣本中的總膽固醇含量定量測(cè)定。本試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,不宜用于臨床診斷或其他用途。

 

產(chǎn)品組成:

試劑名稱

100T

保存條件

試劑(A)COD-PAP

工作液

Good's buffer

30ml

-20℃,避光

膽固醇氧化酶

膽固醇激酶

過氧化物酶

4-氨基安替比林

穩(wěn)定劑

試劑(B)TC標(biāo)準(zhǔn)(5mmol/L

1ml

-20℃,避光

試劑(C): ddH2O 

1ml

室溫

 

自備材料:

1. 生理鹽水或PBS

2. 離心管、小試管或96孔板

3. 水浴鍋或恒溫箱

4. 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀

5. 全自動(dòng)或半自動(dòng)生化分析儀

 

操作步驟:

1. 樣本處理:

血清、血漿、腦脊液樣本:從待測(cè)樣本中分離出的血清或血漿不應(yīng)有溶血,直接檢測(cè),如超過線性范圍,用生理鹽水稀釋后檢測(cè)。

細(xì)胞樣本:

a、取適量的細(xì)胞(一般推薦>106以上)1000g離心10min,棄上清,留取沉淀。

b、用PBS或生理鹽水清洗1~2次,1000g離心10min,棄上清,留取沉淀。

c、加入200~300μlPBS或生理鹽水勻漿,冰浴條件下超聲破碎細(xì)胞,功率300W,每次3~5s,間隔30s,重復(fù) 3~5次。亦可手動(dòng)勻漿,制備好的勻漿液不可離心;亦可用1~2% Triton X-100冰浴30~60min,制備好的裂解液不可離心。

組織樣本:準(zhǔn)確稱取適量組織樣本,按質(zhì)量(g):生理鹽水或PBS(ml)=19的比例,加入生理鹽水或PBS,冰浴條件下手動(dòng)或機(jī)械勻漿。2500~3000g離心10min,取上清。

2. TC測(cè)定

酶標(biāo)儀、全自動(dòng)生化分析儀TC測(cè)定

加入物(μl)

空白孔

標(biāo)準(zhǔn)孔

待測(cè)孔

ddH2O

3

-

-

TC標(biāo)準(zhǔn)(5mmol/L)

-

3

-

待測(cè)樣本

-

-

3

COD-PAP工作液

300

300

300

 

分光光度計(jì)(1ml比色杯)、半自動(dòng)生化分析儀TC測(cè)定

加入物(ml)

空白管

標(biāo)準(zhǔn)管

待測(cè)管

ddH2O

0.01

-

-

TC標(biāo)準(zhǔn)(5mmol/L)

-

0.01

-

待測(cè)樣本

-

-

0.01

COD-PAP工作液

1

1

1

 

普通分光光度計(jì)(2ml比色杯)TC測(cè)定

加入物(ml)

空白管

標(biāo)準(zhǔn)管

待測(cè)管

ddH2O

0.02

-

-

TC標(biāo)準(zhǔn)(5mmol/L)

-

0.02

-

待測(cè)樣本

-

-

0.02

COD-PAP工作液

2

2

2

各種儀器按上表依次加入試劑。充分混勻, 37℃水浴中孵育5min

立即用相應(yīng)儀器測(cè)定500~520nm吸光度,以空白孔()調(diào)零,讀取標(biāo)準(zhǔn)孔()、測(cè)定孔()的吸光度,分別記為A標(biāo)準(zhǔn)A測(cè)定。

 

機(jī)器參數(shù):

主波長(zhǎng)/次波長(zhǎng)

500/600nm

反應(yīng)類型

終點(diǎn)法

反應(yīng)反向

升反應(yīng)(+)

 

計(jì)算公式:

血清、血漿等液體樣本(空白調(diào)零)

FC(mmol/L)= A測(cè)定/ A標(biāo)準(zhǔn)×5

血清、血漿等液體樣本(全自動(dòng)生化分析儀)

FC(mmol/L)= (A測(cè)定- A空白)/(A標(biāo)準(zhǔn)- A空白)×5

 

組織樣本(空白調(diào)零)

FC(mmol/g)= A測(cè)定/ A標(biāo)準(zhǔn)×5×V2 /( m ×1000)

組織樣本(全自動(dòng)生化分析儀)

FC(mmol/g)= (A測(cè)定- A空白)/(A標(biāo)準(zhǔn)- A空白)×5×V/( m ×1000)

細(xì)胞樣本(空白調(diào)零)

FC(mmol/L)= A測(cè)定/ A標(biāo)準(zhǔn)×5×V2 / V1

細(xì)胞樣本(全自動(dòng)生化分析儀)

FC(mmol/L)= (A測(cè)定- A空白)/(A標(biāo)準(zhǔn) - A空白)×5×V2 / V1

中:m=組織樣本取樣量(g

V1 =細(xì)胞樣本取樣量(ml

V2 =樣本勻漿液總體積(ml

 

參考區(qū)間:

健康成年人理想范圍:<5.2mmol/L(<200mg/dl)

邊緣升高:<5.23~5.69mmol/L(201~219mg/dl)

升高:≥5.72mmol/L(≥220mg/dl)

備注:TC標(biāo)準(zhǔn)(5mmol/L)=442.48mg/dl

 

性能指標(biāo):

外觀

無色至淡黃色澄清液體

線性范圍

0.1~13mmol/L(3.6~500mg/dl)R2 >0.95

靈敏度

檢測(cè)下限0.1mmol/L(3.6mg/dl)

變異系數(shù)

批內(nèi)<3%,批間<5%

空白吸光值

<0.1(1cm光徑)

干擾因素

膽紅素<410μmol/L;血紅蛋白<7g/L;甘油三脂<28.5mmol/L 時(shí),對(duì)結(jié)果無明細(xì)影響。

 

注意事項(xiàng):

1. 上述低溫試劑避免反復(fù)凍融,以免失效或效率下降。

2. COD-PAP工作液如不經(jīng)常使用,應(yīng)充分溶解后分裝-20℃保存,可4℃短期保存。

3. 本法可直接用于檢測(cè)腦脊液中的TC含量,但不能直接檢測(cè)尿液中的TC含量,因?yàn)槲唇?jīng)處理的尿液中含有還原性物質(zhì),影響過氧化物酶反應(yīng)。

4. 檢測(cè)TC的血清或血漿宜用EDTA或肝素抗凝,如不能及時(shí)測(cè)定,密閉保存,4℃可穩(wěn)定一周,-20℃可以穩(wěn)定半年以上。

5. 本法線性范圍可達(dá)13mmol/L,如果樣本TC濃度過高,結(jié)果可能呈假性降低,應(yīng)用生理鹽水稀釋后重測(cè),結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

6. 本試劑盒既可作終點(diǎn)法檢測(cè),又可作速率法檢測(cè)。

7. 本法不適于檢測(cè)游離膽固醇的濃度。

 

保存條件6個(gè)月有效。4℃運(yùn)輸,-20℃保存。


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