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胰蛋白酶溶液(0.1%)
產品貨號:T10398
產品規格:100ml
產品簡介:
胰蛋白酶(Trypsin)是由胰臟產生沒有活性的胰蛋白酶原分泌到小腸后,小腸內的腸肽酶會活化該酶原,形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特點在于已經活化的胰蛋白酶,能夠繼續活化更多胰蛋白酶原,這種過程即自動催化。胰蛋白酶在小腸工作,它會將蛋白質水解為肽,進而分解為氨基酸,其最適溫度約為37℃。
尚寶生物 Trypsin solution(0.1%)含0.1%胰酶、無EDTA、無酚紅,經過濾除菌,可以直接用于培養細胞的消化或者一些組織的消化。通常室溫下1min左右就可以消化下大多數貼壁細胞。抗原修復有多種方法,主要方法可簡要歸納為加熱修復和非加熱抗原修復兩大類。非加熱抗原修復方法包括酶消化、真空負壓、酸水解等方法。目前主要是酶消化法,酶消化是以化學的方法來打斷醛鍵進行修復抗原。
產品組成:
名稱 | 規格 | 保存條件 |
胰蛋白酶溶液(0.1%) | 100ml | -20℃ |
自備材料:
1. PBS、Hanks液或無血清培養液
2. 顯微鏡
3. 離心機
操作步驟(僅供參考):
1. 抗原修復
①切片脫蠟至水。
②切片入H2O2甲醇溶液處理切片10min。
③自來水洗,蒸餾水洗。
④PBS洗3次,每次1min。
⑤將玻片浸入Trypsin solution(0.1%),37℃孵育10~30min。
⑥PBS洗3次,每次3min。
⑦按選好的免疫組化染色方法進行染色。
2. 貼壁細胞的消化
①吸除培養液,用無菌PBS、Hanks液或無血清培養液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量Trypsin solution,略蓋過細胞即可,室溫放置1~2min,不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變化;或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來。此時吸除胰酶細胞消化液。加入含血清的細胞培養液,吹打下細胞,即可直接用于后續實驗。
④如果發現消化不足,則加入Trypsin solution重新消化。
⑤如果發現細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從培養器皿底部脫落,直接用胰酶細胞培養液把細胞全部吹打下來。1000~2000g離心1min,沉淀細胞,盡量去除胰酶細胞消化液后,加入含血清的培養液重新懸浮細胞,即可用于后續實驗。
3. 組織的消化
不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
注意事項:
1. 盡量減少反復凍融的次數,以免失效。
2. 在Trypsin solution過程中,要特別注意避免消化液被細菌污染。
3. Trypsin solution消化細胞時間不宜過長,否則細胞鋪板后生長狀況會較差。
4. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
有效期:12個月有效。
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