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上海尚寶生物科技有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第4年

400-611-0007

植物核DNA大量提取試劑盒使用說明書

時(shí)間:2023/2/6閱讀:241
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植物核DNA大量提取試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào):BA1848

產(chǎn)品規(guī)格:20T

產(chǎn)品簡介:

從植物組織中制備基因組DNA較常采用的方法有氯化離心法、CTAB抽提法等。CTAB抽提法是經(jīng)典且迅速的植物DNA提取法,可以用于多種不同類型植物樣品中DNA的提取,獲得的量很高,但是純度一般,但是足夠用于大多數(shù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

植物核DNA大量提取試劑盒是簡單快速簡便的提取植物核中DNA的試劑盒,先將新鮮植物樣本研磨破碎細(xì)胞壁,采用差速離心法分離出細(xì)胞核并將其破碎,再用CTAB抽提液提取出核DNA。本法制備量大,所提DNA可供進(jìn)一步純化及基因轉(zhuǎn)化使用。該試劑僅用于科研領(lǐng)域,不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成:

產(chǎn)品名稱

20T

保存條件

試劑(A): 核分離緩沖液

500ml

2-8

試劑(B): 核沖洗緩沖液

100ml

2-8

試劑(C): 核儲(chǔ)存緩沖液

20ml

2-8

試劑(D1): 核裂解緩沖液

10ml

2-8

試劑(D2): 蛋白酶K溶液(20mg/ml)

0.5ml

-20℃,避光

試劑(E1): CTAB抽提液

10ml

室溫

試劑(E2): 2-ME

0.5ml

室溫,避光

試劑(F): 蛋白沉淀劑

30ml

2-8℃,避光

試劑(G): CTAB溶液(10%)

2ml

室溫

試劑(H): DNA沉淀液

50ml

室溫,避光

試劑(I): DNA洗滌液

50ml

室溫

試劑(J1): TE buffer

10ml

室溫

試劑(J2): RNase A(10mg/ml)

0.1ml

-20

試劑(K): 乙酸銨溶液(7.5M)

5ml

2-8

自備材料:

1. 液氮、研缽或勻漿器

2. 離心機(jī)、離心管

3. 冰箱、恒溫箱或水浴鍋

4. 二*醚、異丙醇

操作步驟(僅供參考):

()樣品處理及分離細(xì)胞核:

1. 稱取10g幼葉樣本或8g愈傷組織等,置燒杯中,于通風(fēng)櫥中加入預(yù)冷的二*醚,浸沒材料,搖晃1~2min,傾出二*醚,預(yù)冷的水沖洗樣本。

2. 用刀片去除葉脈,并分割成小塊,轉(zhuǎn)入勻漿器或研缽中,加入預(yù)冷的20ml的核分離緩沖液,中速勻漿1~3min。用4層無菌平紋細(xì)布和1Miracloth過濾勻漿至離心管中。

3. 500r/min 4℃離心10min,去上清。沉淀用1~1.3ml核沖洗緩沖液懸浮,再用500r/min 4℃離心10min(重復(fù)2~3次),使細(xì)胞核與細(xì)胞碎片分離,收集細(xì)胞核樣品。細(xì)胞核可懸浮于核儲(chǔ)存緩沖液中,-70℃保存。

()細(xì)胞核破碎及DNA提?。?/span>

1. 配制核裂解液:按核裂解緩沖液:蛋白酶K溶液=1ml0.025ml的比例混合即成。

2. 將上一步分離的核樣品懸浮于0.25ml核裂解液中,37℃保溫30min。再向其中加入5ul 2-ME 90℃預(yù)熱的0.25ml CTAB抽提液,立即混勻。再加入0.5ml的蛋白沉淀劑,溫和地反復(fù)顛倒離心管。室溫下10000 r/min離心10min,上清轉(zhuǎn)入新的離心管。

3. 加入1/10體積的CTAB溶液(10%)[0.05ml]。再次加入等體積[0.5ml]的蛋白沉淀劑,溫和地顛倒混勻離心管,室溫下3500 r/min離心10min,上清轉(zhuǎn)入新的離心管。

4. 加入1/22/3體積預(yù)冷的DNA沉淀液,輕輕混勻,室溫靜置使核酸沉至管底。如果觀察不到沉淀,可在室溫下靜置數(shù)小時(shí)至過夜。

5. 2000g離心2min,輕輕棄上清液。松散的DNA沉淀物置于小離心管中加入0.5~1ml DNA洗滌液,室溫靜置10min,4000r/min離心10min,收集沉淀,重復(fù)操作兩次,清除CTAB

6. 自然干燥DNA,加入2050μl TE buffer- RNase A混合液(1ml+1ul),37℃保溫1h。加入乙酸銨溶液(7.5M)使終濃度為2.5M,并加入2倍體積的預(yù)冷無水乙醇,溫和混勻,室溫放置10min。

7. 室溫15000r/min離心10min,收集沉淀,吹干保存,使用時(shí)溶于適量TE buffer,-20℃保存。注意:TE buffer體積越大,DNA濃度越低。

注意事項(xiàng):

1. 如果每次的使用量很小,可以適當(dāng)分裝后再使用。

2. 用于裂解植物組織或葉片越新鮮,裂解越好、收獲量越大。

3. 二*醚處理材料可促進(jìn)角質(zhì)層溶解及細(xì)胞破裂。

4. 提取過程中的機(jī)械力可使大分子DNA斷裂,因此各步操作均應(yīng)溫和,避免劇烈震蕩。

5. 使用到的器皿、離心管最好經(jīng)過硅化處理。

6. 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期6個(gè)月有效。



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