ABTS自由基清除能力檢測試劑盒（微量法）

產(chǎn)品貨號：BA1868

產(chǎn)品規(guī)格：100管/48樣

產(chǎn)品簡介：

ABTS法可用于親水性和親脂性物質(zhì)抗氧化能力測定，是使用泛的間接檢測方法。ABTS經(jīng)氧化后生成穩(wěn)定的藍(lán)綠色陽離子ABTS自由基，在405nm或734nm處有最大吸收峰。被測物質(zhì)加入ABTS自由基溶液后，所含抗氧化成分能與ABTS自由基發(fā)生反應(yīng)而使反應(yīng)體系褪色，405nm的吸光度下降，在一定范圍內(nèi)其吸光度的變化與自由基被清除的程度成正比。本試劑盒中，通過測定吸光度下降的程度來反映樣本清除ABTS自由基的能力。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

產(chǎn)品組成：

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前加入1mL蒸餾水，充分溶解；用不完的試劑可分裝后保存，-20℃可保存四周，避免反復(fù)凍融；

2. 試劑三工作液的配制：液體置于試劑瓶內(nèi)EP管中。臨用前根據(jù)樣本量按試劑三（µL）：蒸餾水（mL）=1µL:12mL 的比例配成試劑三工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配，用多少配多少，盡量在4h之內(nèi)用完；

3. 試劑四工作液的配制：可先將試劑四-20℃分裝保存。臨用前根據(jù)樣本量按試劑四：試劑一（V:V）=1:9的比例配成試劑四工作液，現(xiàn)配現(xiàn)用，現(xiàn)配現(xiàn)用，用不完的試劑放于-20℃可保存兩周。

4. 試劑五：粉劑置于試劑瓶內(nèi)玻璃瓶中，含有5mg維生素C。臨用前加入2.8mL提取液，充分振蕩溶解； 配成10mmol/L維生素C溶液，用于陽性對照。2-8℃可保存兩周。

5. ABTS工作液的配制：臨用前根據(jù)樣本量按試劑一：試劑二：試劑三工作液（V:V:V）=76:5:4的比例配成ABTS工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配，室溫避光保存，務(wù)必在30分鐘內(nèi)使用。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋、臺式離心機、研缽/粉碎機、烘干箱、30~50 目篩、冰、蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可參考文獻(xiàn)）

1. 植物組織樣本的制備：將新鮮樣本置于60℃烘箱烘干至恒重，研缽研碎（或粉碎機粉碎），過30~50目篩；稱取約0.05g樣本，加入1mL提取液后置于40℃水浴鍋中浸提30min；10000rpm室溫離心10min，取上清，置于冰上待測。

2. 紅酒、果汁等液體樣本：吸取100µL樣本溶液加入900µL提取液，旋渦振蕩混勻，室溫10000rpm離心10min，取上清，置冰上待測。

3. 提取物或者藥物：可用提取液配制成一定濃度，如5mg/mL。

注意：不同樣本清除ABTS自由基的能力可能相差很大，為保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，樣本要根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整（如清除率大于90%，建議將提取的樣本用提取液進(jìn)行稀釋；清除率小于5%，建議加大烘干樣本質(zhì)量或液體樣本體積進(jìn)行提取）。

二、測定步驟 

1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至405nm，分光光度計用蒸餾水調(diào)零。

2. 陽性對照的準(zhǔn)備：若需要線性關(guān)系，建議將10mmol/L的維生素C溶液用提取液配制成1、0.8、0.6、0.4、 0.2、0.1mmol/L的維生素C溶液待用，稀釋可參考下表；若需要清除率約為90%的陽性對照，則建議將10mmol/L維生素C溶液用提取液配制成大于1mmol/L的維生素C溶液待用。

備注：實驗中每個標(biāo)準(zhǔn)管需10µL維生素C溶液。

3. 操作表：在96孔板或EP管中分別加入下列試劑：

三、ABTS自由基清除率的計算

1. 陽性對照的自由基清除率計算公式：

ABTS自由基清除率D_VC% =[(A空白-A陽性對照)÷A空白]×100%。

2. 樣本的自由基清除率計算公式：

ABTS自由基清除率D% =[A空白-(A測定-A對照)]÷A空白×100%。

注意事項： 

1. 不同樣本清除ABTS自由基的能力可能相差很大，如果要比較不同樣本的ABTS自由基清除能力，建議對于同一批樣本加入等量的樣本，紅酒、組織勻漿、果汁等液體樣本加入同樣體積，提取物（或者藥物）配制成同樣濃度。在比較時，將樣本根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，比較同樣濃度（相同稀釋倍數(shù)）的清除率大小。

2. 樣本建議當(dāng)天提取當(dāng)天檢測。

實驗實例： 

1. 取0.05g辣椒加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨，離心取上清后按照測定步驟操作，計算清除率得：

D%=[A空白-(A測定-A對照)]÷A空白×100% =[1.111-(0.365-0.061)]÷1.111×100%=72.637%。