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上海尚寶生物科技有限公司
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SDS裂解液操作步驟:(僅供參考)

時間:2024/2/26閱讀:432
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SDS裂解液

目錄編號:T16008

產品規格:100ml

產品簡介:

   多種成分均可以從細胞中提取總蛋白,例如Triton、SDS、NP-40等。SDS裂解液 (SDS Lysis Buffer)是一種極其強烈的細胞組織快速裂解液并獲得總蛋白質。其裂解液強度大于NP-40裂解液、RIPA裂解液()、RIPA 裂解液()、通用細胞裂解液、WesternIP細胞裂解液,所獲得的蛋白質可以用于Western、染色質免疫共沉淀(ChIP)等。

尚寶生物 SDS Lysis Buffer主要由Tris-HCl、NaCl、SDS等組成,并含有多種蛋白酶抑制劑成分,可以有效抑制蛋白的降解,并維持原有的蛋白間相互作用。

產品組成:

產品組成

規格

保存溫度

SDS Lysis Buffer

100ml

-20

注:自備PMSF溶液(100mM )(可參考尚寶P2010)。

操作步驟:(僅供參考)

()貼壁培養細胞

1. SDS Lysis Buffe室溫溶解混勻,使用前取適量裂解液加入PMSF,使終濃度為1mM。

2. 去除貼壁細胞的培養液,用PBSNS或無血清培養液清洗1次,低速離心,棄上清,留取沉淀。

3. 按照6孔板每孔加入150250μl含有PMSF的裂解液的比例加入SDS Lysis Buffer。移液器輕輕吹打,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液作用于細胞13s 內,細胞就會被裂解。如果是所提蛋白樣品用于CHIP, 應置于冰上或4℃裂解1530min。通常6孔板每孔細胞加入150μl裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200250μl

4. 1000012000g,4℃離心510min(如無低溫離心機,室溫下離心亦可),取上清。

5. 進行后續的Western、染色質免疫共沉淀(ChIP)等操作。

()懸浮培養細胞

1. SDS Lysis Buffer置于室溫溶解混勻后,使用前取適量裂解液加入PMSF,使其最終濃度為1mM。

2. 低速離心懸浮細胞,棄上清,收集沉淀。

3. 用手指輕彈細胞,使其松散。按照6孔板每孔細胞加入150250μl含有PMSF的裂解液的比例,加入SDS Lysis Buffer。通常6孔板每孔細胞加入150μl裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200250μl。再用手指輕彈以充分裂解細胞,充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。通常裂解液作用于細胞13s內,細胞就會被裂解。如果是所提蛋白樣品用于 CHIP, 置于冰上或 4℃裂解 1530min

4. 1000012000g,4℃離心 510min(如無低溫離心機,室溫下離心亦可),取上清。

5. 進行后續的 Western、染色質免疫共沉淀(ChIP)等操作。

()組織樣本

1. SDS Lysis Buffer置于室溫溶解混勻,使用前取適量裂解液加入PMSF,使其最終濃度為1mM。

2. 把組織剪切成細小的碎片,越小越好。

3. 取在液氮或超低溫冰箱中冷凍30min以上的組織,迅速用液氮研磨,研磨過程盡量控制在12min之內,以減少蛋白的降解。

4. 20mg組織加入150250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解1530min。如果是所提蛋白樣品用于CHIP,置于冰上或4℃繼續裂解1020min

5. 步驟3、4亦可以采用如下過程:按照每20mg組織加入150250μl裂解液的比例加入含有PMSFSDS Lysis Buffer。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿,直至充分裂解,過程盡量控制12min之內,以減少蛋白的降解。如果是所提蛋白樣品用于CHIP, 應置于冰上或4℃繼續裂解1020min。

6. 1000012000g4℃離心510min(如無低溫離心機,室溫下離心亦可),取上清。

7. 進行后續的Western、染色質免疫共沉淀(ChIP)等操作。

注意事項

1. 去除貼壁細胞的培養液后,如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不用清洗。

2. 如果裂解不充分可以適當增加裂解液的用量,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量。

3. 在培養細胞的裂解中,如果細胞量較多,必需分裝成50-100萬細胞/離心管,然后再裂解。少量的細胞由于裂解液容易和細胞充分接觸,相對比較容易裂解充分。

4. 如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈Vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

5. 溶解SDS Lysis Buffer時,應盡量縮短溶解時間,避免裂解液中的有效成分失效。

6. 細胞裂解的操作步驟,應置于冰上或4℃進行。

有效期12個月有效



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