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SP(小鼠/兔IgG)-POD Kit說明書

時間:2024/8/12閱讀:93
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SP(小鼠/IgG)-POD Kit說明書

產品貨號:M20313

 

產品規格:3ml/6ml/18ml

 

產品簡介:

本試劑盒適合于一抗為小鼠/IgG的免疫組化實驗DAB顯色SP試劑盒是專為免疫組化和其他免疫檢測而設計的,用以顯示組織和細胞中抗原分布。鏈霉親和素(StreptAvidin)是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質,同親和素一樣,對生物素有的親和力,親和素是一個堿性蛋白質(PI=10),經改造后可以轉變成中性蛋白質。鏈霉親和素等電點接近中性對組織和細胞的非特異吸附很低,因此基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景很低。

 

產品組成:

封閉液(正常山羊血清)

3ml

6ml

18ml

3% H2O2

3ml

6ml

18ml

Bio-羊抗小鼠/IgG濃縮液

60ul

120ul

360ul

鏈酶親和素-POD濃縮液

30ul

60ul

180ul

稀釋液

10ml

20ml

60ml

20×DAB顯色液A

0.3ml

0.6ml

1.8ml

20×DAB顯色液B

0.3ml

0.6ml

1.8ml

 

操作步驟:(以石蠟切片為例)

1. 切片常規脫蠟至水(三次二甲苯,三次乙醇)

2. 3% H2O2室溫處理5-10分鐘以滅活內源性酶。蒸餾水洗3次。

3. 可選步聚:

a. 熱修復抗原,將切片浸入0.01M檸檬酸鈉緩沖液(PH6.0),電爐或微波爐加熱至沸騰后斷電,間隔5-10分鐘后,反復1-2次。冷卻后PBSpH7.2-7.6)洗滌1-2次。

b. 酶消化,滴加消化液,3710分鐘,PBSpH7.2-7.4)洗滌2-3次。

c. 跳過此步,直接進入下一步。

4. 滴加封閉液,室溫20分鐘。甩去多余液體,免洗。

5. 用稀釋液將一抗按一定比例稀釋(稀釋后的一抗4℃可保存一周),也可另行購買抗體稀釋液。滴加稀釋的一抗37℃孵育1小時左右或202小時左右,也可4℃過夜。PBSpH7.2-7.4)洗滌3次,每次2分鐘。(一抗的稀釋度、孵育時間和溫度與染色強度、背景有直接關系。一般來說,陽性染色強度不夠時,可提高一抗濃度和延長孵育時間;背景過高時,可降低一抗濃度和縮短孵育時間。)

6. 根據用量,用稀釋液將Bio-羊抗小鼠/IgG濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10ulBio-羊抗小鼠/IgG濃縮液混勻,此工作液4℃可保存一周)。滴加Bio-羊抗小鼠/IgG工作液,20-37℃孵育30分鐘。PBSpH7.2-7.4)洗滌3次,每次2分鐘。

7. 根據使用量,用稀釋液將鏈酶親和素-POD濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10ul鏈酶親和素-POD濃縮液混勻,此工作液4℃可保存一周)。滴加鏈酶親和素-POD工作液,20-37℃,30分鐘。PBSpH7.2-7.4)洗滌4次,每次5分鐘。

8. DAB顯色:根據用量,用PBSpH7.2-7.4)配制,按1ml PBS加入50ul 20×DAB顯色液A,加入50ul 20×DAB顯色液B 。充分混勻后滴加到切片上。室溫顯色,鏡下控制反應時間,一般在5-30分鐘之間。蒸餾水洗滌終止反應。 蘇木素輕度復染。脫水,透明,封片。顯微鏡觀察。 對于細胞爬片,固定后,PBS漂洗兩次,再用0.5% Triton X-100 室溫孵育20分鐘,PBS漂洗兩次,3% H2O2處理15分鐘;PBS漂洗兩次,接上述第4步。對于冰凍切片,固定后,PBS漂洗兩次,接上述第二步。

 

注意事項:

如果染色背景過高,在SP反應之后,DAB顯色之前,用加有0.01—0.02% TWEEN-20PBSTpH7.2-7.4)洗滌切片4次,PBS2次,然后DAB顯色。

 

保存:

如果長時間不使用,請將所有試劑存放于-20℃,如經常使用,可將封閉液,3% H2O220×DAB顯色液B存放于2-8℃以方便使用。

 

 


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