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半胱氨酸(Cys)含量檢測試劑盒(微量法)
產(chǎn)品貨號:BA1048
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣
產(chǎn)品說明:
蛋白質(zhì)含有三種含硫氨基酸:甲硫氨酸、胱氨酸和半胱氨酸(Cys)。其中,Cys是一種含有巰基的含硫 氨基酸,從甲硫氨酸轉(zhuǎn)化而來,并且可與胱氨酸互相轉(zhuǎn)化。Cys參與蛋白質(zhì)二硫鍵的形成,經(jīng)常是蛋白質(zhì)活性中心的組成部分,還可以為其它生理生化反應(yīng)提供巰基。此外,Cys大量積聚在皮膚和粘膜表面,在角蛋白生成中維持重要的巰基酶的活性,并且補充巰基,以維持皮膚的正常代謝,調(diào)節(jié)表皮最下層的色素細胞生成的底層黑色 素。具有美白、解毒、改善炎癥和過敏性皮膚等作用。
Cys還原磷鎢酸生成鎢藍,在600nm處有吸收峰;通過測定600nm吸光度,計算Cys含量。
注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
產(chǎn)品內(nèi)容:
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體50mL×1瓶 | 4℃ |
試劑一 | 液體15mL×1瓶 | 4℃ |
試劑二 | 粉劑×1瓶 | 4℃ |
試劑三 | 粉劑×1支 | 4℃ |
溶液的配制:
1. 試劑二:用前一天,向試劑二中加2mL蒸餾水充分溶解,再加磷酸0.5mL,混勻后蓋緊(防止水分散失)沸水浴2h;冷卻后加8mL蒸餾水,4℃可保存2周。
2. 標準品:10mg半胱氨酸。將標準品加入4.13mL蒸餾水,可得到20μmol/mL的標準液。4℃可以保存4周。
技術(shù)指標:
檢出限:0.0066μmol/mL
線性范圍:0.03125-3μmol/mL
所需的儀器和用品:
低溫離心機、可調(diào)式移液槍、可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、磷酸和蒸餾 水。
操作步驟:
一、樣本處理(可適當調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)
1. 液體樣本中半胱氨酸提?。喝?/span>0.2mL液體樣本,加提取液0.3mL,充分混勻,11000rpm 4℃離心10min,取上清液待測。
2. 組織中半胱氨酸提?。悍Q取約0.2g組織,加入提取液0.5mL,冰上充分研磨,11000rpm 4℃離心10min,取上清液待測。
二、測定步驟
1. 可見分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長到600nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 標準液的配制:將標準品加入0.826mL蒸餾水,可得到100μmol/mL的標準液,然后用蒸餾水稀釋為2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625μmol/mL濃度的標準溶液。
3. 按下表步驟加樣:
試劑名稱(μL) | 測定管 | 標準管 | 空白管 |
工作液 | 40 | - | - |
標準品 | - | 40 | - |
蒸餾水 | - | - | 40 |
試劑一 | 100 | 100 | 100 |
試劑二 | 60 | 60 | 60 |
混勻后室溫靜置15min,于600nm處測定吸光值。
三、半胱氨酸含量計算
1. 標準曲線的繪制:
以各標準溶液濃度為x軸,以?A(A標準管-A空白管)為y軸做標準曲線,得到方程y=kx+b。將(A測定管-A 對照管)帶入方程求x值。
2. 半胱氨酸含量計算:
(1)按液體樣本的體積計算
半胱氨酸含量(μmol/mL)=x×V樣總÷V樣1= 2.5x
(2)按樣本質(zhì)量計算
半胱氨酸含量(μmol/g 質(zhì)量)= x×V樣2÷(W×V樣2÷V樣總)=0.5x÷W
V樣1:提取體系中加入的樣本體積,0.2mL;V樣2:反應(yīng)體系中加入的樣本體積,0.04mL;V樣總:提取體系體積,0.5mL;W:樣本質(zhì)量,g。
注意事項:
如果測定吸光值超過線性范圍吸光值,可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進行測定。
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