Na+K+- ATP 酶活性檢測試劑盒(可見分光光度法)
產品貨號:BA1037
產品規格:50管/24樣
產品內容:
試劑一:液體30mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體4mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×2支,-20℃保存。臨用前用1mL蒸餾水溶解,現用現配。用不完的試劑-20℃可保存一周。
試劑四:液體2mL×1瓶,4℃保存。
試劑五:粉劑×1瓶,4℃保存。用時加入3mL雙蒸水, 4℃保存。
試劑六:粉劑×1瓶, 4℃保存。用時加入15mL雙蒸水,溶解后4℃保存一周。
試劑七:粉劑×1瓶, 4℃保存。用時加入15mL雙蒸水,溶解后4℃保存一周。
試劑八:液體15mL×1瓶,室溫保存。
標準品:10μmol/mL標準磷貯備液1mL×1支,4℃保存。
0.5μmol/mL 標準磷應用液配制:將標準品20倍稀釋,即取0.1mL標準品加1.9mL蒸餾水充分混勻。
定磷劑的配制:按H2O:試劑六:試劑七:試劑八=2:1:1:1的比例配制,配好的定磷劑應為淺黃色。若無色則試劑失效,若是藍色則為磷污染,定磷劑現用現配。
注意:配試劑最好用新的燒杯、玻璃棒和玻璃移液器,也可以用一次性塑料器皿,避免磷污染。
產品說明:
Na+K+- ATP 酶廣泛分布于植物、動物、微生物和細胞中,可催化ATP水解生成ADP和無機磷。
Na+K+-ATP 酶分解ATP生成ADP及無機磷,通過測定無機磷的量來確定ATP酶活性。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣品酶液的制備:
1、細菌、細胞或組織樣品的制備:
細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照每500萬細菌或細胞加入1mL試劑一,超聲波破碎細菌或細胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。
二、測定步驟
1、可見分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至660nm,蒸餾水調零。
2、酶促反應(在EP管中加入下列試劑)
對照管 | 測定管 | |
試劑一(μL) | 130 | 90 |
試劑二(μL) | 80 | 80 |
試劑三(μL) | 40 | 40 |
試劑四(μL) | 40 | |
樣品(μL) | 200 | |
混勻,37℃(哺乳動物)或25℃(其他物種)準確水浴10min | ||
試劑五(μL) | 50 | 50 |
樣品(μL) | 200 | |
混勻,4000g,常溫離心10min,取上清液 |
3 定磷
空白管 | 標準管 | 對照管 | 測定管 | |
0.5μmol/ml標準磷應用液(μL) | 100 | |||
上清液(μL) | 100 | 100 | ||
蒸餾水(μL) | 100 | |||
定磷試劑(μL) | 1000 | 1000 | 1000 | 1000 |
混勻,40℃水浴10min,在660nm處,記錄各管吸光值。 |
三、計算
1、血清(漿)Na+K+-ATPase活力的計算:
定義:規定每小時每毫升血清(漿)中Na+K+- ATP酶分解ATP產生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。
Na+K+-ATP 酶活力(U/mL)= C標準管×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)×V總÷V樣÷T
=7.5×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)
2、組織、細菌或細胞中Na+K+- ATPase活力的計算:
(1)按蛋白濃度計算:
定義:規定每小時每毫克組織蛋白中Na+K+- ATP酶分解ATP產生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。
Na+K+-ATP 酶活力(U/mg prot)= C標準管×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)×V總÷(Cpr×V樣)÷T =7.5×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算:
定義:規定每小時每克組織中Na+K+-ATP酶分解ATP產生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。
Na+K+-ATP 酶活力(U/g鮮重)= C標準管×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)×V總÷(V樣÷V樣總×W)÷T=7.5×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷W
(3)按細菌或細胞密度計算:
定義:規定每小時每1萬個細菌或細胞中Na+K+-ATP酶分解ATP產生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。
Na+K+-ATP 酶活力(U/104)= C標準管×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)×V總÷(V樣÷V樣總×500)÷T=0.015×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)
C標準管:標準管濃度,0.5μmol/mL;V總:酶促反應總體積,0.5mL;V樣:加入樣本體積,0.2mL ;V樣總:加入試劑一體積,1mL;T:反應時間,1/6小時;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;500:細菌或細胞總數,500萬。
注意事項:
1、由于每一個樣都必須做對照,本試劑盒50管保證測24份Na+K+-ATP酶。
2、此法具有微量、靈敏、快速的特點。所以對測定所用試管要求嚴格無磷。
3、空白管和標準管各只要做一管。
Na+K+- ATP 酶活性檢測試劑盒(可見分光光度法)
產品貨號:BA1037
產品規格:50管/24樣
產品內容:
試劑一:液體30mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體4mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×2支,-20℃保存。臨用前用1mL蒸餾水溶解,現用現配。用不完的試劑-20℃可保存一周。
試劑四:液體2mL×1瓶,4℃保存。
試劑五:粉劑×1瓶,4℃保存。用時加入3mL雙蒸水, 4℃保存。
試劑六:粉劑×1瓶, 4℃保存。用時加入15mL雙蒸水,溶解后4℃保存一周。
試劑七:粉劑×1瓶, 4℃保存。用時加入15mL雙蒸水,溶解后4℃保存一周。
試劑八:液體15mL×1瓶,室溫保存。
標準品:10μmol/mL標準磷貯備液1mL×1支,4℃保存。
0.5μmol/mL 標準磷應用液配制:將標準品20倍稀釋,即取0.1mL標準品加1.9mL蒸餾水充分混勻。
定磷劑的配制:按H2O:試劑六:試劑七:試劑八=2:1:1:1的比例配制,配好的定磷劑應為淺黃色。若無色則試劑失效,若是藍色則為磷污染,定磷劑現用現配。
注意:配試劑最好用新的燒杯、玻璃棒和玻璃移液器,也可以用一次性塑料器皿,避免磷污染。
產品說明:
Na+K+- ATP 酶廣泛分布于植物、動物、微生物和細胞中,可催化ATP水解生成ADP和無機磷。
Na+K+-ATP 酶分解ATP生成ADP及無機磷,通過測定無機磷的量來確定ATP酶活性。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣品酶液的制備:
1、細菌、細胞或組織樣品的制備:
細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照每500萬細菌或細胞加入1mL試劑一,超聲波破碎細菌或細胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。
二、測定步驟
1、可見分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至660nm,蒸餾水調零。
2、酶促反應(在EP管中加入下列試劑)
對照管 | 測定管 | |
試劑一(μL) | 130 | 90 |
試劑二(μL) | 80 | 80 |
試劑三(μL) | 40 | 40 |
試劑四(μL) | 40 | |
樣品(μL) | 200 | |
混勻,37℃(哺乳動物)或25℃(其他物種)準確水浴10min | ||
試劑五(μL) | 50 | 50 |
樣品(μL) | 200 | |
混勻,4000g,常溫離心10min,取上清液 |
3 定磷
空白管 | 標準管 | 對照管 | 測定管 | |
0.5μmol/ml標準磷應用液(μL) | 100 | |||
上清液(μL) | 100 | 100 | ||
蒸餾水(μL) | 100 | |||
定磷試劑(μL) | 1000 | 1000 | 1000 | 1000 |
混勻,40℃水浴10min,在660nm處,記錄各管吸光值。 |
三、計算
1、血清(漿)Na+K+-ATPase活力的計算:
定義:規定每小時每毫升血清(漿)中Na+K+- ATP酶分解ATP產生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。
Na+K+-ATP 酶活力(U/mL)= C標準管×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)×V總÷V樣÷T
=7.5×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)
2、組織、細菌或細胞中Na+K+- ATPase活力的計算:
(1)按蛋白濃度計算:
定義:規定每小時每毫克組織蛋白中Na+K+- ATP酶分解ATP產生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。
Na+K+-ATP 酶活力(U/mg prot)= C標準管×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)×V總÷(Cpr×V樣)÷T =7.5×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算:
定義:規定每小時每克組織中Na+K+-ATP酶分解ATP產生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。
Na+K+-ATP 酶活力(U/g鮮重)= C標準管×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)×V總÷(V樣÷V樣總×W)÷T=7.5×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)÷W
(3)按細菌或細胞密度計算:
定義:規定每小時每1萬個細菌或細胞中Na+K+-ATP酶分解ATP產生1μmol無機磷的量為一個酶活力單位。
Na+K+-ATP 酶活力(U/104)= C標準管×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)×V總÷(V樣÷V樣總×500)÷T=0.015×(A測定管-A對照管)÷(A標準管-A空白管)
C標準管:標準管濃度,0.5μmol/mL;V總:酶促反應總體積,0.5mL;V樣:加入樣本體積,0.2mL ;V樣總:加入試劑一體積,1mL;T:反應時間,1/6小時;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;500:細菌或細胞總數,500萬。
注意事項:
1、由于每一個樣都必須做對照,本試劑盒50管保證測24份Na+K+-ATP酶。
2、此法具有微量、靈敏、快速的特點。所以對測定所用試管要求嚴格無磷。
3、空白管和標準管各只要做一管。
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