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細(xì)胞活力/毒性檢測(CCK-8試劑盒)

參  考  價:90 - 4200
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
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    生產(chǎn)商

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    上海市

規(guī)格

1ml/100次 90元 999瓶 可售

5ml/500次 300元 999瓶 可售

50ml/5000次 2800元 999瓶 可售

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更新時間:2022-02-18 14:04:18瀏覽次數(shù):1774次

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供貨周期 現(xiàn)貨 應(yīng)用領(lǐng)域 化工,生物產(chǎn)業(yè)
CCK-8(Cell Counting Kit-8)試劑檢測細(xì)胞活力,可用于細(xì)胞增殖和毒性分析,方法簡便而準(zhǔn)確。其基本原理為:該試劑中的WST-8與MTT類似,在電子載體1-甲氧基PMS的作用下,被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的橙黃色甲臜染料,甲臜的生成量與活細(xì)胞的數(shù)量和活力成正比,因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。

產(chǎn)品簡介:

細(xì)胞活力/毒性檢測(CCK-8試劑盒),可用于細(xì)胞增殖和毒性分析,方法簡便而準(zhǔn)確。其基本 原理為:該試劑中的 WST-8 與 MTT 類似,在電子載體 1-甲氧基 PMS 的作用下,被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原為具 有高度水溶性的橙黃色甲臜染料(Formazan),甲臜的生成量與活細(xì)胞的數(shù)量和活力成正比,因此可利用這一特 性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。


操作步驟:

1、使用 96 孔板,細(xì)胞培養(yǎng)和處理完畢。

2、每 100μl 細(xì)胞培養(yǎng)液加入 CCK-8 試劑 10μl。

3、培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱,37℃孵育 1~4 小時。

4、于 450nm 處測定 OD 值。

5、結(jié)果分析將各測試孔的 OD 值減去對照孔或調(diào)零孔 OD 值。各平行孔的 OD 值取平均數(shù)。

細(xì)胞活力%=(加藥細(xì)胞 OD-空白 OD)/(對照細(xì)胞 OD-空白 OD)×100%.

6、若使用 96 孔外的培養(yǎng)板,試劑用量等比例增減。


注意事項:

1、*使用時,建議先做幾個孔摸索條件,考察接種細(xì)胞的數(shù)量和加入 CCK-8 試劑后的培養(yǎng)時間。

2、加入試劑速度要快,以避免試劑殘留和加樣速度不一所致反應(yīng)時間不同造成的顯色誤差。有條件的情況下,建 議采用多通道移液器,可以減少平行孔間的差異。為避免槍頭上的殘留所帶來的加樣誤差,CCK-8 試劑可在加樣前 用培養(yǎng)基稀釋混勻。

3、試劑加入后輕輕振搖培養(yǎng)板,使 CCK-8 試劑與培養(yǎng)基充分混勻。

4、試劑加入后培養(yǎng)時間根據(jù)細(xì)胞種類的不同和每孔細(xì)胞數(shù)量的多少而異。對于貼壁細(xì)胞,加入 CCK-8 的培養(yǎng)時間 一般為 1~4 小時,但在培養(yǎng) 30 分鐘左右即可取出肉眼觀察顯色程度(根據(jù)細(xì)胞種類而定)。與貼壁細(xì)胞相比,懸 浮細(xì)胞較難顯色。對于懸浮細(xì)胞,在加入 CCK-8 培養(yǎng) 1~4 小時后,可先從培養(yǎng)箱中取出,目測染色程度或用酶標(biāo) 儀測定決定。白細(xì)胞較難顯色,因此需要較長的 CCK-8 反應(yīng)時間或增加細(xì)胞數(shù)量(~105 個細(xì)胞/孔)。若顯色困難, 可以將培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱,繼續(xù)培養(yǎng)數(shù)小時后再確定;注意:CCK-8 的反應(yīng)時間以具體顯色的時間為準(zhǔn)。

5、CCK-8 試劑中的 WST-8 會與還原劑反應(yīng)生成 WST-8 甲臜,如果實驗中有還原劑,需要檢查背景的 OD 值,即在不 含細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入藥物,然后加入 CCK-8 試劑在一定時間內(nèi)檢測,和不加藥物的培養(yǎng)基進(jìn)行比較(只加 CCK-8 試劑),如果 OD 值明顯偏高,則說明有反應(yīng)。

6、若細(xì)胞培養(yǎng)時間較長導(dǎo)致培養(yǎng)基顏色或 pH 發(fā)生變化,建議更換新鮮培養(yǎng)基后再加入 CCK-8 試劑。含有酚紅的 培養(yǎng)基不影響本試劑使用。

7、如果樣品為高渾濁度的細(xì)胞懸液,建議設(shè)定 600nm(或 600nm 以上)作為參比波長,扣除參比波長的 OD 值即可。

8、如果要測定細(xì)胞的具體數(shù)量,需要先做一個標(biāo)準(zhǔn)曲線。

9、若測得 OD 值過高,可酌減鋪板細(xì)胞數(shù)或 CCK-8 試劑用量。


試劑的優(yōu)點:

1、結(jié)果準(zhǔn)確,重現(xiàn)性好 試劑不影響細(xì)胞活力,顯色產(chǎn)物直接溶解于培養(yǎng)液,直接測定 OD 值即可, 可準(zhǔn)確反 應(yīng)細(xì)胞活力。

2、操作省時簡單 試劑即開即用,無需配制;只需一步操作,即可測定。

3、安全性好 不含放射性同位素和有害有機(jī)溶劑,使用安全。

4、靈敏度高 靈敏度高于 MTT、XTT 和 MTS 等方法。


貯藏條件:

在避光 0-5℃的條件下存放一年,測定效果*不變。在-20℃的條件下可以貯存更久。反復(fù)凍融會增加背景 值,經(jīng)常使用時請于 0~5℃條件下保存。

本產(chǎn)品僅供科研使用,不做其它用途。



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