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上海市
2×100ml 150元 999瓶可售
2×500ml 450元 999瓶可售
更新時(shí)間:2021-09-24 16:21:28瀏覽次數(shù):245次
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貨號(hào) | T11027 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品貨號(hào):T11027
產(chǎn)品規(guī)格:2×100ml/2×500ml
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
堿裂解法是常用的小量制備質(zhì)粒DNA的方法,可用于抽提微克級(jí)別的質(zhì)粒DNA。葡萄糖-Tris-EDTA溶液(GTE)、NaOH/SDS溶液和乙酸鉀溶液(5mol/L,pH4.8)是其常用試劑。NaOH/SDS溶液由NaOH溶液和SDS溶液等組成,臨用前等量混合使用,溶液呈堿性,是堿裂解法提DNA的重要成分。其原理是:當(dāng)菌體在NaOH和SDS溶液中裂解時(shí),蛋白質(zhì)與DNA發(fā)生變性,加入中和液(乙酸鉀溶液)后,質(zhì)粒DNA分子迅速?gòu)?fù)性,呈溶解狀態(tài),離心時(shí)留在上清中,由于蛋白質(zhì)和染色體DNA不復(fù)性而呈絮狀,離心時(shí)可沉淀下來(lái)。該試劑僅用于科研領(lǐng)域,不適用于臨床診斷或其他用途。
產(chǎn)品組成:
產(chǎn)品名稱 | 2×100ml | 2×500ml | 保存條件 |
試劑(A): NaOH溶液 | 100ml | 500ml | 室溫 |
試劑(B):SDS溶液 | 100ml | 500ml | 室溫 |
操作步驟(僅供參考):
1. 配置 NaOH/SDS 溶液:取 NaOH 溶液和 SDS 溶液等比例混合后使用,宜臨用前配置。
2. 接種一個(gè)單菌落于 LB 培養(yǎng)基中,37℃培養(yǎng)至飽和狀態(tài)。
3. 取 1.5ml 培養(yǎng)液,10000~12000g 離心 20~60s,棄上清。
4. 用 100μl 葡萄糖-Tris-EDTA 溶液*重懸沉淀,室溫靜置 5min。
5. 加入 200μl 新鮮配置的 NaOH/SDS 溶液,顛倒混勻數(shù)次,可在冰上放置 2~5min,使細(xì)胞膜破裂。
6. 加入 150μl 乙酸鉀溶液,將管溫和顛倒數(shù)次混勻,見白色絮狀沉淀,可在冰上放置 3~5min,此時(shí),質(zhì)量 DNA復(fù)性,染色體和蛋白質(zhì)不可逆變性,形成不可溶復(fù)合物。
7. 加入 150μl 酚氯仿異戊醇,震蕩混勻,4℃12000r/min 離心 10min。繼續(xù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng):
1. NaOH 溶液呈強(qiáng)堿性,請(qǐng)小心操作,如果皮膚接觸,應(yīng)盡快擦干并用流水充分沖洗。
2. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
有效期:12個(gè)月。
· 細(xì)胞活力/毒性檢測(cè)試劑盒
· 蛋白提取相關(guān)試劑盒
· 蛋白定量/濃度測(cè)定試劑盒
· 核酸純化/提取相關(guān)試劑盒
· 核酸檢測(cè)試劑盒
· 染色試劑盒
· 生化試劑盒檢測(cè)試劑盒
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