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當前位置:上海尚寶生物科技有限公司>>試劑盒>>核酸類>> Trizol提取法組織細胞RNA提取試劑盒 核酸類

組織細胞RNA提取試劑盒 核酸類

參  考  價:220 - 380
具體成交價以合同協(xié)議為準
  • 型號

    Trizol提取法

  • 品牌

    其他品牌

  • 廠商性質(zhì)

    生產(chǎn)商

  • 所在地

    上海市

規(guī)格

50T 220元 999瓶可售

100T 380元 999瓶可售

更新時間:2021-10-13 16:25:03瀏覽次數(shù):885次

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T/100T
貨號 T11131 應用領(lǐng)域 化工,生物產(chǎn)業(yè)
組織細胞RNA提取試劑盒 核酸類RNA的種類來源比較多,提取制備的方法各異,一般有苯酚法、去污劑法和鹽酸胍法,其中常用的是苯酚法,即Trizol法提取RNA。

組織細胞RNA提取試劑盒(Trizol提取法)

產(chǎn)品貨號:11131

產(chǎn)品規(guī)格:50T/100T

產(chǎn)品簡介:

RNA的種類來源比較多,提取制備的方法各異,一般有苯酚法、去污劑法和鹽酸胍法,其中常用的是苯酚法,即Trizol法提取RNA。 Trizol含苯酚和異硫氰酸胍等物質(zhì),能迅速裂解細胞或組織并且滅活核酸酶,保持RNA的完整性。加入氯仿并離心后,溶液形成上層為水相(無色)、中間層、下層為有機相(紅色)。上層用異丙醇沉淀回收總RNA,中間層用乙醇沉淀回收DNA,下層用異丙醇沉淀回收蛋白。組織細胞RNA提取試劑盒(Trizol提取法)適用于從各種組織或細胞中快速分離總RNA,既可用于小量樣品(50~100mg組織、5×106細胞),也可用于大量樣品(>1g組織/>107細胞)。提取的總RNA質(zhì)量高,可用于Northern blot、Dot blot、polyA篩選、體外翻譯、RNase保護分析和分子克隆。本產(chǎn)品具有以下特點:①適用范圍廣;②操作簡單,整個過程1小時內(nèi)完成;③純度高;④污染少。

產(chǎn)品組成:

名稱

50T

100T

保存條件

試劑(A): Trizol Reagent  

50ml

100ml

4℃,避光

試劑(B): RNA 分離液

10ml

20ml

室溫,避光

試劑(C): DNA沉淀液

50ml

100ml

室溫

試劑(D): RNA洗滌液

10ml

100ml

室溫

試劑(E): RNase-free ddH2O

10ml

20ml

室溫

        試劑(F): RNA 保存液              10ml               20ml        4℃,避光

自備材料:

1. 液氮\研缽或勻漿器

2. 經(jīng) RNase free 處理的移液器吸頭、EP 管等耗材

3. 低溫高速離心機、低溫冰箱


操作步驟(僅供參考)

  1. 樣品準備

    ⑴ 貼壁細胞:①直接裂解:直接在培養(yǎng)瓶/皿中加入 Trizol 裂解細胞,每 10cm2面積加 1ml,用移液器吹打混勻。②胰蛋白酶消化:用無菌 PBS 洗滌細胞后,加入含有 0.05~0.25%胰蛋白酶的 PBS 處理細胞,當細胞脫離容器壁后,加入含有血清的培養(yǎng)基終止反應,將細胞溶液轉(zhuǎn)移至無 RNase 的離心管中,以下參考懸浮細胞相關(guān)操作步驟。

    ⑵ 懸浮細胞:無需清洗細胞,直接 5000~6000g 離心 5min,收集細胞沉淀,去除上清。收集細胞時一定要將細胞培養(yǎng)液去除干凈,否則裂解不*,降低 RNA 收獲率。每 5×106~107,動物、植物和酵母細胞或每 10 細菌細胞加入 1ml Trizol,充分振蕩混勻。

    ⑶ 組織:取新鮮動物或者植物組織或者-70℃凍存組織,50~100mg 組織在液氮中充分研磨或者加入 1ml Trizol研磨或者用勻漿器勻漿處理。樣品體積一般不超過 Trizol 體積的 10 %。研磨要迅速,以 1min 為佳。⑷ 血液:取 0.5~1 ml 新鮮或凍存的血液,12000g 離心 5 min,去除血漿,加入 1 ml Trizol,充分振蕩混勻。

2. 核酸分離:充分振蕩混勻(可以置于低溫/超低溫冰箱凍存 5~10 min 后,充分振蕩,反復 1~3 次)。將裂解樣品或勻漿液室溫靜置 5~10min,使核蛋白與核酸*分離。

3. 樣品分層:加入 0.2 ml RNA 分離液,振蕩 15 s,室溫靜置 2~3min。12000 g 4℃離心 10~15 min。上層為水相,中間層和下層為有機相,RNA 在上層水相。4. 沉淀 RNA:吸取上層水相(約 500μl)轉(zhuǎn)移至無 RNase

4. 沉淀 RNA:吸取上層水相(約 500μl)轉(zhuǎn)移至無 RNase 的離心管中(不要吸取任何中間層物質(zhì),否則會有染色體DNA 污染),加入等體積 RNA 沉淀液混勻,室溫放置 15~20min。12000 g 4℃離心 10min,離心后管側(cè)或管底形成膠狀沉淀,棄上清。

5. 洗滌 RNA:加入 1ml RNA 洗滌液輕輕洗滌沉淀,室溫放置 5~10min,7500g 4℃離心 5min,棄上清。室溫干燥 5~10min,不宜過分干燥,否則 RNA 難以溶解。

6. 溶解 RNA:加入 30~50ul RNase-free dd H 2 O 充分溶解,-70℃長期保存或直接用于后續(xù)試驗。對于肝、胰腺、腎等組織中 RNase 含量高的樣品沉淀用 RNA 保存液溶解。


注意事項:

1. 樣品保存:加入 Trizol 混勻后,樣品可在-70℃放置 1~2 月;RNA 樣品可以在 70%酒精中-70℃保存 2~4周:如果需要長期保存,應置于超低溫冰箱中保存

2. Trizol Reagent 和 RNA 分離液含有腐蝕性物質(zhì),污染皮膚或眼睛后,立即用清水或生理鹽水沖洗,必要時尋求醫(yī)生的幫助。

3. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期:12個月有效。



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