總抗氧化能力（T-AOC）檢測試劑盒（可見分光光度法）

正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定。

產品貨號：BA1467

產品規格：50管/48樣

產品內容：

提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存，使用前預冷。

試劑一：液體35mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體20mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體5mL×1瓶，4℃避光保存。

標準品：粉劑×1支，10mgFeSO4·7H2O，4℃保存。臨用前加入1.75ml蒸餾水，滴加1滴濃硫酸，制備20µmol/mL FeSO4標準溶液。

混合液(現配現用)：將試劑一、試劑二、試劑三按7:1:1的比例混合，使用前預溫至37℃。

產品說明：

測定對象中各種抗氧化物質和抗氧化酶等構成總抗氧化水平。在生物學、醫學和藥學研究中常常檢測血漿、血清、唾液、尿液等各種體液，細胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。

在酸性環境下，還原Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)產生藍色的Fe2+-TPTZ 的能力反映了總抗氧化能力。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、恒溫水浴鍋、低溫離心機、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣品的制備：

(1) 血清、血漿、唾液或尿液樣品

血漿（制備時可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝，不宜使用EDTA抗凝）5000r/min離心10min，取上清待測。血清、唾液或尿液樣品直接用于測定，也可以-80℃凍存（不宜超過30 d）后再測定。

(2) 細胞或組織樣品收集約100-200萬個細胞或者約0.1g組織，加入1.0mL預冷的提取液，勻漿或超聲以充分破碎

細胞并釋放其中的抗氧化物，4℃、10000r/min 離心5分鐘，取上清待測。需測定蛋白濃度。

二測定步驟

1、標準曲線繪制：

將20μmol/mL FeSO4標準溶液稀釋至 0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.00156μmol/mL，分別取500μL標準溶液（蒸餾水作空白）加入500μL試劑二，充分混勻，反應10min，雙蒸水調零，1cm光徑，測定A593，計算ΔA=A標準-A空白，此時Fe²⁺終濃度為 0.1、0.05、 0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.00156、0.00078μmol/mL。

2、分光光度計預熱30min以上，調節波長至593nm，蒸餾水調零。

3、操作表

三、總抗氧化能力計算

1、標準曲線繪制

以Fe²⁺終濃度為橫坐標，以△A為縱坐標繪制標準曲線，得到線性回歸方程y=kx+b，將△Aˊ帶入方程求得 x(μmol/mL）。

2、計算公式：

單位定義：樣品的抗氧化能力以達到同樣吸光度變化值（△A）所需的標準液離子濃度表示。

（1）按蛋白濃度計算

總抗氧化能力（U/mg prot）=x×V反總÷（V樣×Cpr）=34×x÷ Cpr

（2）按樣品質量計算

總抗氧化能力（U/g鮮重）=x×V反總÷（V樣÷V樣總×W）=34×x÷ W

（3）按細胞數量計算

總抗氧化能力（U/10⁴cell）= x×V反總÷（V樣÷V樣總×細胞數量）= 34×x÷細胞數量

（4）按液體體積計算

總抗氧化能力（U/mL）=x×V反總÷V樣=34×x

V樣總：加入提取液體積，1mL；V反總：反應總體積，1.02mL；V樣：反應中樣品體積，0.03mL；W：樣品質量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；細胞數量：以10⁴為單位，萬個。

注意事項：

1.        試劑二對人體有刺激性，請采取適當的防護措施。為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴乳膠手套操作。

2.        盡量避免使用在酸性條件下呈藍色或接近藍色的樣本，否則對本試劑盒的檢測結果產生干擾。

3.        樣品中不宜添加Tween、Triton和NP-40等去垢劑和 DTT、巰基乙醇等影響氧化還原反應的還原劑。

4.        如果樣品測定出來的吸光值在標準曲線范圍以外，需把樣品適當稀釋或濃縮后再進行測定。

5.        試劑盒2-8℃保存。