酸性木聚糖酶(ACX)活性檢測(cè)試劑盒（微量法）

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1279

產(chǎn)品規(guī)格：100管/48樣

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生，能催化水解木聚糖，也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細(xì)胞壁以及β-葡聚糖，降低釀造中物料的粘度，促進(jìn)有效物質(zhì)的釋放，以及降低飼料中的非淀粉多糖，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，因而廣泛的應(yīng)用于釀造和飼料工業(yè)中，酸性木聚糖酶(ACX)一般分離自耐酸的真菌，細(xì)菌及部分霉菌。

ACX在酸性環(huán)境下能將木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，進(jìn)一步在沸水浴條件下與3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應(yīng)，在540nm處有特征吸收峰，反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，通過(guò)測(cè)定反應(yīng)液在540nm吸光值增加速率，可計(jì)算ACX活力。

產(chǎn)品內(nèi)容：

緩沖液：液體60mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體7mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑二：液體10mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體4mL×1瓶，4℃保存。

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1支，4℃保存。10mg木糖，臨用前加入667µL蒸餾水溶解，得到100µmol/mL木糖溶液，蒸餾水稀釋50倍得到2µmol/mL木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。

需自備的儀器和用品：

天平、低溫離心機(jī)、恒溫水浴鍋，可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板和蒸餾水。

操作步驟：

一、粗酶液提取

1、發(fā)酵液：發(fā)酵液于8000rpm，4℃，離心15min，取上清，作為待測(cè)樣品。

2、酶干粉：稱約1mg，加1mL緩沖液溶解，蒸餾水稀釋10倍待測(cè)。

3、組織樣品：稱約0.1g組織，加入1mL緩沖液，冰上充分研磨。8000rpm，4℃，離心15min，取上清蒸餾水稀釋 10倍待測(cè)。

二、測(cè)定步驟

1、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至540nm，蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測(cè)定（在EP管中加入下列試劑）

三、ACX 活性計(jì)算：

1、發(fā)酵液ACX活力計(jì)算：

酶活定義：50℃，pH4.8條件下，每毫升發(fā)酵液每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1µmol還原糖所需的酶量為一個(gè)酸性木聚糖酶的活力單位。

ACX活力（U/mL）=C標(biāo)準(zhǔn)×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）÷T

=0.067×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）

C標(biāo)準(zhǔn)：木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，2µmoL/mL；T：反應(yīng)時(shí)間，30min。

2、酶干粉ACX活力計(jì)算：

酶活定義：50℃，pH4.8條件下，每毫克酶每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1µmol還原糖所需的酶量為一個(gè)酸性木聚糖酶的活力單位。

ACX 活力（U/mg）= 10×C標(biāo)準(zhǔn)×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）×V提取÷W1÷T

=0.67×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）÷W1

10：樣本稀釋倍數(shù)，10倍；C標(biāo)準(zhǔn)：木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，2µmoL/mL；V提取：加入緩沖液體積，1mL；W1：酶干粉重量，mg；T：反應(yīng)時(shí)間，30min。

3、組織中ACX活力計(jì)算：

（1）按樣品蛋白濃度計(jì)算：

酶活定義：50℃，pH 4.8條件下，每mg組織蛋白每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1µmol還原糖所需的酶量為一個(gè)酸性木聚糖酶的活力單位。

ACX 活力（U/mg prot）= 10×C標(biāo)準(zhǔn)×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）×V樣品÷（V樣品×Cpr）÷T

=0.67×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）÷Cpr

（2）按樣品鮮重計(jì)算：

酶活定義：50℃，pH4.8條件下，每克組織每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1µmol還原糖所需的酶量為一個(gè)酸性木聚糖酶的活力單位。

ACX 活力（U/g 鮮重）= 10×C標(biāo)準(zhǔn)×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）×V提取÷W2÷T

=0.67×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）÷W2

10：樣本稀釋倍數(shù)，10倍；C標(biāo)準(zhǔn)：木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，2µmoL/mL；V提取：加入緩沖液體積，1mL；W2：樣本鮮重，g；T：反應(yīng)時(shí)間，30min；Cpr：樣品蛋白濃度，mg/mL；V樣品：加入的樣品體積，0.06mL。

注意事項(xiàng)：

吸光度變化應(yīng)該控制在0.01~1.5之間，否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計(jì)算公式中參與計(jì)算的稀釋倍數(shù)要相應(yīng)改變。