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供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50管/48樣 |
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貨號 | BA1248-50 | 應用領域 | 化工,生物產業 |
葡萄糖脫氫酶(GCDH)活性檢測試劑盒(紫外分光光度法)
注意:正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。
產品貨號:BA1248
產品規格:50管/48樣
產品簡介:
GCDH(EC 1.1.1.47)催化D-葡萄糖和NAD(P)生成D-葡萄糖酸和NAD(P)H,主要存在于多種微生物和高等動物的肝臟中。GCDH是一種制備高含量低聚果糖的理想用酶,同時也是臨床血糖測定的診斷用酶,可廣泛用于食品工業及醫藥工業領域中。
GCDH 催化D-葡萄糖和NAD生成D-葡萄糖酸和NADH,利用NADH在340 nm處吸光值的變化即可反映葡萄糖脫氫酶的活性。
產品內容:
提取液:液體60 mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體50 mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加入15mL試劑一溶解,用不完的試劑4℃保存。
試劑三:粉劑×2瓶,-20℃避光保存。臨用前每瓶加入5mL試劑一溶解,用不完的試劑建議分裝后-20℃避光保存,避免反復凍融。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計、臺式低溫離心機、水浴鍋、1 mL石英比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、粗酶液提?。?/span>
組織:按照組織質量(g)︰提取液體積(mL)為1︰5~10的比例(建議稱取約0.1 g組織,加入1 mL提取液)進行冰浴勻漿,然后,8000 g,4℃,離心10 min,取上清置于冰上待測。
細胞或細菌:先收集細胞或細菌到離心管內,離心后棄上清;按照細胞數量(104個)︰提取液體積(mL)為500~1000︰1的比例(建議500萬個細胞或細菌加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞或細菌(功率20%或200 W,超聲3s,間隔7s,總時間5min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
血漿(清):直接檢測。
二、測定步驟:
1、分光光度計預熱30min以上,調節波長至340 nm,蒸餾水調零。
2、工作液的配制:按照試劑一︰試劑二︰試劑三為4︰3︰2的體積比例充分混勻,備用,用前37℃預熱10 min。
3、 操作表:在1mL石英比色皿中分別加入下列試劑:
試劑名稱(μL) | 空白管 | 測定管 |
工作液 | 900 | 900 |
樣本 | 100 | |
蒸餾水 | 100 | |
加入樣本即開始計時,立即混勻,于340nm處測定10s時的吸光值A1,迅速置于37℃水浴或培養箱1min,拿出迅速擦干測定1min 10s 時的吸光值A2,計算ΔA測定管=A2測定-A1測定,ΔA空白管=A2空白-A1空白,ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管。空白管只需做1-2次。 |
三、GCDH 酶活計算:
(1)按蛋白濃度計算
酶活定義:每毫克蛋白每分鐘產生1nmol 的NADH定義為一個酶活力單位。
GCDH 酶活(U/mg prot)=ΔA÷(ε×d)×109×V反總÷(V樣×Cpr)÷T=1607.7×ΔA÷Cpr
(2)按樣本質量計算
酶活定義:每克樣品每分鐘產生1nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
GCDH 酶活(U/g 鮮重)=ΔA÷(ε×d)×109×V反總÷(V樣×W÷V樣總)÷T =1607.7×ΔA÷W
(3)按細菌和細胞數量計算
酶活定義:每104個細胞每分鐘產生1nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
GCDH 酶活(U/104cell)=ΔA÷(ε×d)×109×V反總÷(V樣÷V樣總×細胞數量(萬個))÷T
=1607.7×ΔA÷細胞數量(萬個)
(4)按液體體積計算
酶活定義:每mL樣本每分鐘產生1nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
GCDH 酶活(U/mL)=ΔA÷(ε×d)×109×V反總÷V樣÷T=1607.7×ΔA
ε:NADH 摩爾消光系數,6.22×103 L/ mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;109:單位換算系數, 1mol=109 nmol;V反總:反應體系總體積,1×10-3 L;V樣:反應體系中樣本體積,0.1mL;V樣總: 加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質量,g,T:反應時間:1min。
注意事項:
1、樣本提取上清液置于冰上待測,且樣本提取完成后建議當天提取當天內測完。
2、當A1或A2大于1時,建議將樣品用提取液稀釋后再進行測定。
3、當ΔA大于1時,建議將樣品用提取液稀釋后再進行測定。
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