葡萄糖氧化酶（GOD）活性檢測試劑盒（微量法）

注意：正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。

產品貨號：BA1245

產品規格：100管/96樣

產品簡介：

GOD（EC 1.1.3.4）廣泛存在于動物和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并產生H₂O₂，是生物體中產生活性氧的代謝途徑之一。

GOD催化葡萄糖產生H₂O₂，過氧化物酶在有氧存在時催化H₂O₂分解產生的氧又將鄰聯茴香胺氧化生成有色物質，顏色深淺與葡萄糖氧化酶活性成線性關系。

產品內容：

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體15mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：液體3mL×1瓶，4℃保存；

試劑三：液體1mL×1支，-20℃保存，融化后可分裝保存。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水

操作步驟：

一、樣品測定的準備

1、組織處理：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進行冰浴勻漿；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）：直接檢測。

二、測定步驟

1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至500nm，蒸餾水調零。

2、GOD工作液的配制：取15mL試劑一加3mL試劑二混勻（現配現用）。

3、加樣表：

樣品測定前將GOD工作液與試劑三放入37℃水浴中保溫，然后將上述試劑按順序加入微量比色皿/96孔板中，加樣本的同時開始計時；在500 nm波長下記錄20秒時的初始吸光度A1及1分20秒時的吸光度A2。計算?A=A2-A1。

三、GOD活力單位的計算

a.用微量玻璃比色皿測定的計算公式如下

1、動物組織 GOD 活力的計算

（1）按蛋白濃度計算

單位的定義：每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘催化產生1µmol氧化型鄰聯茴香胺定義為一個酶活力單位。

GOD（U/mg prot）=?A÷(ε×d)×V反總÷(Cpr×V樣)÷T=1333×?A÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位的定義：每g組織在反應體系中每分鐘催化產生1µmol氧化型鄰聯茴香胺定義為一個酶活力單位。

GOD（U/g鮮重）=?A÷(ε×d)×V反總÷(W÷V提取×V樣)÷T=1333×?A÷W

2、血清（漿）GOD 活力的計算

單位的定義：每mL血清（漿）在反應體系中每分鐘催化產生1µmol 氧化型鄰聯茴香胺定義為一個酶活力單位。

GOD（U/mL）=?A÷(ε×d)×V反總÷T÷V樣本=1333×?A

V反總：反應總體積，0.2mL；V樣本：加入樣本體積，0.02mL；V提取，加入提取液體積，1mL；cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；d：光徑，1cm；ε：氧化型鄰聯茴香胺消光系數，7.5×10^-3mL/µmol/cm；T：反應時間，1min。

b.用96孔板測定的計算公式如下

1、動物組織GOD活力的計算

（1）按蛋白濃度計算

單位的定義：每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘催化產生1µmol氧化型鄰聯茴香胺定義為一個酶活力單位。

GOD（U/mg prot）=?A÷(ε×d)×V反總÷(Cpr×V樣)÷T=2222×?A÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位的定義：每g組織在反應體系中每分鐘催化產生1µmol氧化型鄰聯茴香胺定義為一個酶活力單位。

GOD（U/g 鮮重）=?A÷(ε×d)×V反總÷(W÷V提取×V樣)÷T=2222×?A÷W

2、血清（漿）GOD 活力的計算

單位的定義：每mL血清（漿）在反應體系中每分鐘催化產生1µmol氧化型鄰聯茴香胺定義為一個酶活力單位。

GOD（U/mL）=?A÷(ε×d)×V反總÷T÷V樣本=2222×?A

V反總：反應總體積，0.2mL；V樣本：加入樣本體積，0.02mL；cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；d：光徑，0.6cm；ε：氧化型鄰聯茴香胺消光系數，7.5×10^-3mL/µmol/cm；T：反應時間，1min

注意事項：

1、不同勻漿組織中GOD活力不一樣，做正式試驗之前請做1-2只預試，若A2-A1>1, 則說明組織活力太高，必須用提取液稀釋成適當濃度勻漿上清液，使A2-A1<1，以提高檢測靈敏度。

實驗過程中若出現A1> A2現象請將樣本用提取液稀釋成適當濃度.

2、最好兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結果的準確性。

3、此試劑盒僅適用于動物組織和動物血清（漿）。