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琥珀酸脫氫鈉(SDH)活性檢測試劑盒

參  考  價:面議
具體成交價以合同協議為準
  • 型號

    BA1164-50

  • 品牌

    其他品牌

  • 廠商性質

    生產商

  • 所在地

    上海市

更新時間:2021-11-23 11:55:21瀏覽次數:187次

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供貨周期 現貨 規格 50管/48樣
貨號 BA1164-50 應用領域 化工,生物產業
琥珀酸脫氫鈉(SDH)活性檢測試劑盒
SDH(EC1.3.5.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中。SDH是線粒體的一種標志酶,位于線粒體內膜上的一種膜結合酶,是連接呼吸電子傳遞和氧化磷酸化的樞紐之一。此外,為多種原核細胞產能的呼吸鏈提供電子。

琥珀酸脫氫鈉(SDH)活性檢測試劑盒(可見分光光度法)

注意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

產品貨號:BA1164

 

產品規格:50/48

 

產品說明:

SDHEC1.3.5.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中。SDH是線粒體的一種標志酶,位于線粒體內膜上的一種膜結合酶,是連接呼吸電子傳遞和氧化磷酸化的樞紐之一。此外,為多種原核細胞產能的呼吸鏈提供電子。

SDH催化琥珀酸脫氫生成延胡索酸,脫下的氫通過吩嗪二甲酯硫酸(PMS)傳遞還原2,6-二氯酚靛酚(DCPIP),并且在600nm處具有特征吸收峰,通過600nm吸光度的變化,測定26-DPIP的還原速度,代表SDH酶活性。

 

產品內容:

試劑一:液體60mL×1瓶,-20℃保存;

試劑二:液體0.6mL×1瓶,-20℃保存;

試劑三:液體5mL×1瓶,4℃保存;

試劑四:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入到試劑三中溶解待用;

試劑五:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入4mL雙蒸水,用不完的試劑仍4℃保存;

試劑六:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入3.333mL雙蒸水,用不完的試劑4℃保存。

 

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

 

操作步驟:

一、SDH的提取

準確稱取0.1g組織或收集500萬細胞,加入1mL試劑一和10uL試劑二,用冰浴勻漿器或研缽勻漿充分研磨,4℃11000g離心10min,取上清,置冰上待測。

二、測定步驟和加樣表

1、分光光度計預熱30min以上,調節波長至600nm,蒸餾水調零。

2、樣本測定

試劑名稱(µL

測定管

對照管

試劑三

60

60

試劑五

60

60

蒸餾水

800

800

37(哺乳動物)25℃(其它物種)保溫10min左右

樣本

30


蒸餾水


30

試劑六

30

30

 

 

 

 

 

 

 

 

 

    依次加各試劑到1mL比色皿中,在加入試劑六的同時開始計時;在600nm波長下記錄20秒時的初始吸光度A1,比色后迅速將比色皿連同反應液一起放入37℃(哺乳動物)25℃(其它物種)水浴中,準確反應1分鐘;迅速取出比

色皿并擦干,600nm下比色,記錄120秒時的吸光度A2,計算ΔA=A1-A2,得到ΔA測定,ΔA空白。

三、SDH活性的計算

1mL比色皿測定的計算公式如下

(1)按樣本蛋白濃度計算

單位的定義:每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘消耗1nmol2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。

SDH活性(U/mgprot)=[ΔA測定-ΔA空白)÷ε×d×V反總×109]÷(Cpr×V)÷T

1555.556×ΔA測定-ΔA空白)÷Cpr

(2)按樣本鮮重計算

單位的定義:每g組織在反應體系中每分鐘消耗1nmol2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。

SDH活性(U/g鮮重)=[ΔA測定-ΔA空白)÷ε×d×V反總×109]÷(V÷V樣總×W)÷T

1571.111×ΔA測定-ΔA空白)÷W

(3)按細菌或細胞密度計算單位的定義:每1萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘消耗1nmol2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。

SDH活性(U/104cell)=[ΔA測定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反總×109]÷(V÷V樣總×500)÷T

3.142×ΔA測定-ΔA空白)

V反總:反應體系總體積,0.98×10-3L;            ε2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數,21×103L/mol/cm;  

d:比色皿光徑,1cm                       V樣:加入樣本體積,0.03mL;

V樣總:加入試劑一和試劑二體積,1.01mL;      T:反應時間,1min

Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;                W:樣品質量,g;

500:細菌或細胞總數,500萬。

 

注意事項:

1、測定過程中所有試劑和樣本在冰上放置,以免變性失活。

2、若ΔA大于0.5,需將酶液用酶提取液稀釋,使ΔA小于0.5,可提高檢測靈敏度。


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