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供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50管/48樣 |
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貨號 | BA1105-50 | 應用領域 | 化工,生物產業 |
過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒(可見分光光度法)
注意:正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。
產品貨號:BA1105
產品規格:50管/48樣
產品簡介:
POD(EC 1.11.1.7)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,可催化過氧化氫氧化酚類和胺類化合物,具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用。POD催化H2O2氧化特定底物,在470nm有特征光吸收。
產品內容:
提取液:液體60mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體60mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:液體0.33mL×2瓶,4℃保存;用時每瓶加入5mL試劑一;用不完的試劑4℃保存一周;
試劑三:液體10mL×1瓶,4℃保存。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、粗酶液提取:
1、 細菌、細胞或組織樣品的制備:
細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30 次);8000g 4℃離心10min, 取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、 血清(漿)樣品:直接檢測。
二、測定步驟:
1、分光光度計預熱30min以上,調節波長至470nm,蒸餾水調零。
2、測定前將試劑一、二和三37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)放置10min。
3、樣本測定表
試劑名稱(μL) | 測定管 |
樣本 | 15 |
蒸餾水 | 270 |
試劑一 | 520 |
試劑二 | 130 |
試劑三 | 135 |
在1mL玻璃比色皿中按順序加入上述試劑,立即混勻并計時,記錄470nm下30s時的吸光值A1和1min30s后的吸光值A2。計算ΔA=A2-A1。
三、POD 活性計算:
1、血清(漿)POD活性
單位定義:每mL血清(漿)在每mL反應體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。
計算公式:POD(U/mL)=ΔA×V反總÷V樣÷0.01÷T =7133×ΔA
2、組織、細菌或細胞POD活性
(1) 按樣本蛋白濃度計算
單位定義:每mg組織蛋白在每mL反應體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。
POD(U/mg prot)=ΔA×V反總÷(V樣×Cpr)÷0.01÷T =7133×ΔA÷Cpr
(2) 按樣本鮮重計算
單位定義:每g組織在每mL反應體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。
POD(U/g 鮮重)=ΔA×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷0.01÷T =7133×ΔA÷W
(3) 按細菌或細胞數量計算
單位定義:每1萬個細菌或細胞在每mL反應體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。
POD(U/104 cell)=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.01÷T =14.27×ΔA
V反總:反應體系總體積,1.07mL;V樣:加入樣本體積,0.015mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應時間,1min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;500:細菌或細胞總數,500萬。
注意事項:
1、若一次性測定樣本較多,可將試劑一、二、三和蒸餾水按比例配成混合液,在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)放置10min以上,測定時加入15µL樣本和1055µL混合液測定。
2、如果ΔA小于0.005,可將反應時間延長到5min。如果ΔA大于0.5,可將樣本用提取液稀釋后測定,計算公式中乘以相應稀釋倍數。
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