過(guò)氧化氫（H2O2）含量檢測(cè)試劑盒（硫酸鈦比色法）

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1543

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

過(guò)氧化氫(H2O2)是生物體內(nèi)最常見(jiàn)的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化產(chǎn)生，由CAT和POD等催化降解。H2O2不僅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互轉(zhuǎn)化的樞紐。生命體內(nèi)積累的H2O2是由一些氧化物催化超氧陰離子發(fā)生氧化還原反應(yīng)而形成，H2O2相對(duì)超氧陰離子性質(zhì)穩(wěn)定，但其存在可以直接或間接導(dǎo)致細(xì)胞膜脂質(zhì)過(guò)氧化損害，加速細(xì)胞的衰老和解體，H2O2也是許多氧化應(yīng)激反應(yīng)中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。

過(guò)氧化氫(H2O2)檢測(cè)試劑盒(硫酸鈦比色法)其檢測(cè)原理是H2O2與硫酸鈦反應(yīng)生成的過(guò)氧化物-鈦復(fù)合物黃色沉淀，溶解于強(qiáng)酸中，其黃色深淺與過(guò)氧化氫濃度在一定范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，可通過(guò)比色法檢測(cè) 412nm 處吸光度。該試劑盒主要用于檢測(cè)植物組織、血清、血漿等樣品中過(guò)氧化氫(H2O2)含量。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1.        蒸餾水、丙酮

2.        勻漿器或研缽

3.        低溫離心機(jī)

4.        分光光度計(jì)、比色杯

操作步驟：（僅供參考）

1.  準(zhǔn)備樣品：

①植物樣品：取正常或逆境下的新鮮植物組織，清洗干凈，擦干，切碎，迅速稱取5g，加入5ml預(yù)冷的丙酮，在冰浴條件下迅速勻漿或研磨，4℃ 12000g離心20min，收集上清液，測(cè)量提取液總體積，4℃保存?zhèn)溆谩?/span>

②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測(cè)定，4℃保存，用于過(guò)氧化氫的檢測(cè)。

③高活性樣品：如果樣品中含有較高濃度的過(guò)氧化氫，可以使用丙酮進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2.  配制10mM H2O2標(biāo)準(zhǔn)溶液：由于過(guò)氧化氫不是非常穩(wěn)定，使用前需自行測(cè)定過(guò)氧化氫

的實(shí)際濃度。本試劑盒提供的H2O2基液的H2O2濃度約為1M，用蒸餾水稀釋100倍,使H2O2濃度約為10mM。蒸餾水調(diào)零，分光光度計(jì)測(cè)定A₂₄₀，根據(jù)公式H2O2濃度(mM)=22.94×A₂₄₀計(jì)算出H2O2基液中H2O2的實(shí)際濃度，再用丙酮稀釋H2O2基液配制10mM H2O2-丙酮標(biāo)準(zhǔn)溶液。(一般情況下，新配制的10mM H2O2基液A₂₄₀為 0.4~0.45，3個(gè)月以后A₂₄₀為0.35~0.42)

按下表依次稀釋(常用濃度0.3-3mM,即1~5號(hào))：

3.  配制硫酸鈦溶液：0.3g硫酸鈦加入6ml蒸餾水中，即為5%硫酸鈦溶液，4℃保存。

4.  H2O2加樣：按照下表設(shè)置空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、測(cè)定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的H2O2濃度過(guò)高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置平行管。

5.  H2O2測(cè)定：混勻，室溫放置5min，12000g離心15min，棄上清液，留取沉淀，如有必要可加入預(yù)冷丙酮反復(fù)洗滌沉淀物。向各管的沉淀中加入2ml酸性基液，搖動(dòng)，使沉淀*溶解。比色杯光徑1cm，空白管調(diào)零，分光光度計(jì)測(cè)定412nm處各標(biāo)準(zhǔn)管、測(cè)定管的吸光度，如果沒(méi)有分光光度計(jì)，亦可用酶標(biāo)儀檢測(cè)。

計(jì)算：以系列丙酮-H2O2標(biāo)準(zhǔn)(0.3、0.5、0.8、1、3、5、8 mM)為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得回歸方程。以測(cè)定管吸光度代入回歸方程求得待測(cè)樣品中H2O2的濃度。

組織樣品H2O2 (mmol/g)=(C₀×V_T×N)/m

液體樣品H2O2 (mmol/L)=C₀×N

式中：C₀=根據(jù)待測(cè)樣品的吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線求得H2O2濃度(mM)

V_T=待測(cè)樣品的總體積(L)

m=樣品質(zhì)量(g)

N=樣本稀釋倍數(shù)

注意事項(xiàng)：

1.        本試劑盒亦可用酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)，但檢測(cè)的樣本數(shù)相應(yīng)增加。

2.        加入堿性基液、硫酸鈦溶液時(shí)，應(yīng)直接加入至溶液中，不要粘到管壁。

3.        過(guò)氧化物-鈦復(fù)合物黃色沉淀溶解于酸性基液時(shí)需要一段時(shí)間，需*溶解，否則有可能影響測(cè)定結(jié)果。

4.        H2O2基液和堿性基液應(yīng)嚴(yán)格密閉保存，避免揮發(fā)，否則效率會(huì)下降。

5.        H2O2基液和酸性基液有一定腐蝕性，請(qǐng)小心操作。

6.        硫酸鈦溶解于水后應(yīng)盡早使用，如暫時(shí)不用，可短期放置4℃冰箱保存。亦可用分析天平稱取一定量的粉劑，配置5%的濃度即可。

7.        為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期：12個(gè)月有效。4℃運(yùn)輸。