當前位置:上海尚寶生物科技有限公司>>試劑盒>>生化試劑盒>> BA1545-100果膠酶檢測試劑盒(DNS微板法)
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T |
---|---|---|---|
貨號 | BA1545-100 | 應用領域 | 化工,生物產業(yè) |
果膠酶檢測試劑盒(DNS微板法)
產品貨號:BA1545
產品規(guī)格:100T
產品簡介:
天然果膠類物質以原果膠、果膠(Pectin)、果膠酸的形態(tài)廣泛存在于植物的果實、根、莖、葉中,是細胞壁的一種組成成分,它們伴隨纖維素而存在,構成相鄰細胞中間層粘結物,使植物組織細胞緊緊黏結在一起。果膠酶(Pectinase)是一類分解果膠質酶類的總稱,實質是多聚半乳糖醛酸水解酶,包括原果膠酶,果膠酯酶,多聚半乳糖醛酸酶和果膠裂解酶四大類,廣泛存在于植物果實和微生物中,主要用于食品、釀酒、環(huán)保、醫(yī)藥、紡織及日化用品行業(yè)。
果膠酶檢測試劑盒(DNS微板法)檢測原理是果膠酶水解果膠生成β-半乳糖醛酸,通過二硝基水楊酸(DNS)與反應形成紫紅色的化合物,該化合物呈色強度與半乳糖醛酸濃度成正比,于酶標儀測定吸光度,通過與標準曲線比較,計算出樣品中果膠酶活性。該試劑盒主要用于定量檢測植物組織或果實中果膠酶,反應顏色越深,吸光度越大,果膠酶的活性越強。該100T試劑盒可以檢測約95-98次樣本。該試盒僅用于科研領域,不宜用于臨床診斷或其他用途。
產品組成:
產品名稱 | 100T | 保存條件 |
試劑(A):果膠標準(1mg/ml) | 1ml | 4℃,避光 |
試劑(B): Pectinase Lysis buffer | 250ml | 室溫 |
試劑(C): Pectinase Assay buffer | 25ml | 4℃,避光 |
試劑(D): DNS顯色液 | 65ml | 4℃,避光 |
自備材料:
1. 蒸餾水
2. 實驗材料:桃子、李子、蘋果、杏等果實或其他植物組織
3. 研缽或勻漿器
4. 離心管或試管
5. 離心機
6. 水浴鍋
8. 酶標儀
操作步驟:
1. 果膠酶提取:取果實或其他植物組織,洗凈,擦干,稱取剪碎的新鮮樣品,置于提前4℃預冷的研缽或勻漿器,加入預冷的Pectinase Lysis buffer,充分研磨或勻漿后轉入離心管或試管,離心。留取上清液,即為果膠酶提取液,保存待用。
2. 稀釋果膠標準溶液:取適量的果膠標準(1mg/ml),按下表進行稀釋:
加入物(μL) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
果膠標準(1mg/ml) | 4 | 8 | 12 | 16 | 20 |
蒸餾水 | 196 | 192 | 188 | 184 | 180 |
果膠含量(μg) | 4 | 8 | 12 | 16 | 20 |
3. 加樣:按照下表設置空白管、標準管、對照管、測定管,溶液應按照順序依次加入,并注意避免產生氣泡,小心混勻。如果樣品中的果膠酶活性過高,可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定。樣品的檢測最好能設置平行管,求平均值。
加入物(ml) | 空白管 | 標準管 | 對照管 | 測定管 |
蒸餾水 | 0.2 | - | - | - |
系列果膠標準(1-5號管) | - | 0.2 | - | - |
果膠酶提取液 | - | - | 0.2(提前煮沸5min) | 0.2 |
Pectinase Lysis buffer | 0.4 | 0.4 | 0.4 | 0.4 |
Pectinase Assay buffer | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
水浴,立即加入下述DNS顯色液 | ||||
DNS顯色液 | 0.6 | 0.6 | 0.6 | 0.6 |
4. 測定:沸水浴,自來水中將離心管或試管冷卻至室溫,以蒸餾水稀釋,混勻。取上述空白管、標準管、測定管中溶液,加至96孔板的孔中,用酶標儀以空白調零,測定系列標準孔、對照孔、測定孔在吸光度。
計算:
以1-5號管系列果膠標準(4、8、12、16、20μg)為橫坐標,以對應的吸光度為縱坐標,繪制標準曲線,直接計算直線回歸方程。以測定孔吸光度減去對照孔吸光度的差值作為測定吸光度值(A測定),帶入回歸方程求得的定管果膠酶含量,根據下述公式計算其活性:
組織樣品的果膠酶活性(μg/hg)=(m×v)/(W×t×VS)
式中:m=根據標準曲線求得的測定管果膠酶含量(μg)
V=果膠酶提取液總體積(ml)
W=樣品鮮重(g)
t=37℃水浴時間(h)=1
VS=測定時所取果膠酶提取液的體積(ml)=0.2
液體樣品的果膠酶活性(μg/h·ml)=m×N/V
式中:m=根據標準曲線求得的測定管果膠酶含量(μg)
N=稀釋倍數(shù)
V=測定時所取果膠酶提取液的體積(ml)=0.2
注意事項:
1. 取樣量、試劑用量應根據果膠含量適當調整。?
2. 可溶性糖對測定結果有較大影響,應*去除樣品中的可溶性糖。
3. Pectinase?Lysis?buffer應密閉避光保存,避免有效成分揮發(fā)。?
4. 如果沒有酶標儀,也可以使用普通的分光光度計測定,但應考慮分光光度計的最小檢測體積。?
5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
有效期:6個月有效。
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼
以上信息由企業(yè)自行提供,信息內容的真實性、準確性和合法性由相關企業(yè)負責,化工儀器網對此不承擔任何保證責任。
溫馨提示:為規(guī)避購買風險,建議您在購買產品前務必確認供應商資質及產品質量。