甘油三酯（TG）含量檢測試劑盒（微量法）

注意：正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。

產品貨號：BA1110

產品規格：100管/96樣

產品簡介：

TG是長鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，不僅是細胞膜的主要成分，也是重要呼吸底物。 測定原理： 用異丙醇抽提取TG，KOH皂化TG后水解生成甘油及脂肪酸，過碘酸氧化甘油生成甲醛，在氯離子存在下甲醛與乙酰丙酮縮合生成黃色物質，在420 nm有特征吸收峰，其顏色的深淺與TG含量成正比。

產品內容：

試劑一：自備，取玻璃空瓶，加入60mL正庚烷，60mL異丙醇，蓋緊后混勻，4℃保存。

試劑二：液體3mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：液體10mL×1瓶，4℃保存。

試劑四：液體3mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑五：液體10mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑六：液體10mL×1瓶，4℃避光保存。

標準品：粉劑×1瓶，臨用前加5mL試劑一，即1mg/mL甘油三酯標準溶液，4℃保存。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液槍、微量比色皿/96孔板、雙蒸水和125mL玻璃空瓶。

操作步驟：

一、TG的提取：

1、組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清待測。

2、細胞、細菌：先收集400-500萬細胞或細菌到離心管內，棄上清，加1mL試劑一，超聲波破碎1min（強度20％，超聲2s，停1s），8000g， 4℃離心10min，取上清待測。

3、血清（漿）等液體樣品：直接測定。

二、測定操作：

1. 分光光度計預熱30min，調節波長到420 nm，蒸餾水調零。

2. 水浴鍋預熱到65℃。

加試劑一后充分混勻，再加試劑二，劇烈振蕩30s，靜置，待分層后取上層溶液15µL，置于新的EP管中。

3．甘油三酯含量測定：

轉移至微量比色皿/96孔板測定420nm處吸光度，記為A空，A標和A測。

注意：空白管和標準管只需測定一次。

三、計算公式：

1. 血清（漿）中甘油三酯含量：

TG含量（mg/dL）=C標準品×（A測－A空）÷（A標－A空）

=（A測－A空）÷（A標－A空）

C標準品：標準品濃度，1mg/mL；100：單位換算系數，1dL=100 mL。

2. 組織中甘油三酯含量：

(1)按樣本蛋白濃度計算

TG含量（mg/mg prot）= C標準品×V×（A測－A空）÷（A標－A空）÷（Cpr ×V）

=（A測－A空）÷（A標－A空）÷ Cpr

(2)按樣本鮮重計算

TG含量（mg/g 鮮重）=C標準品×V×（A測－A空）÷（A標－A空）÷W

=（A測－A空）÷（A標－A空）÷ W

C標準品：1mg/mL ；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g ;V：加入試劑一的體積，1mL。

3. 細胞、細菌中甘油三酯含量：

TG含量（mg/10⁴ cell）=C標準品×（A測－A空）÷（A標－A空）÷細菌或細胞密度

=（A測－A空）÷（A標－A空）÷細菌或細胞密度

C標準品：標準品濃度，1mg/mL；細菌或細胞密度：10⁴ cell/mL

注意事項：

1. 試劑盒中有易揮發性物質，實驗過程中需佩戴手套和口罩，試劑瓶蓋打開后應該及時蓋緊。

2. 加試劑二后需劇烈震蕩，使待測液中甘油三酯得到充分提取。

3. 低檢出限為100µ mol/L。