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當前位置:上海尚寶生物科技有限公司>>試劑盒>>生化試劑盒>> BA1119-50谷胱甘肽S-轉移酶(GST)活性檢測試劑盒

谷胱甘肽S-轉移酶(GST)活性檢測試劑盒

參  考  價:面議
具體成交價以合同協議為準
  • 型號

    BA1119-50

  • 品牌

    其他品牌

  • 廠商性質

    生產商

  • 所在地

    上海市

更新時間:2021-11-23 16:43:40瀏覽次數:190次

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供貨周期 現貨 規格 50管/48樣
貨號 BA1119-50 應用領域 化工,生物產業
谷胱甘肽S-轉移酶(GST)活性檢測試劑盒
谷胱甘肽S-轉移酶(glutathione S-transferase,GST)是一種具有多種生理功能的蛋白質家族,主要存在于細 胞質內。GST是體內解毒酶系統的重要組成部分,主要催化各種化學物質及其代謝產物與GSH的巰基共價結合, 使親電化合物變為親水物質,易于從膽汁或尿液中排泄,達到將體內各種潛在或具備毒性的物質降解并排出體外 的目的。

谷胱甘肽S-轉移酶(GST)活性檢測試劑盒(紫外分光光度法)

注意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定。

 

產品貨號:BA1119

 

產品規格:50/48

 

產品說明:

谷胱甘肽S-轉移酶(glutathione S-transferaseGST)是一種具有多種生理功能的蛋白質家族,主要存在于細 胞質內。GST是體內解毒酶系統的重要組成部分,主要催化各種化學物質及其代謝產物與GSH的巰基共價結合, 使親電化合物變為親水物質,易于從膽汁或尿液中排泄,達到將體內各種潛在或具備毒性的物質降解并排出體外 的目的。因此,GST在保護細胞免受親電子化合物的損傷中發揮著重要的生物學功能。此外,因為GST具有GSH-Px 活性,亦稱為non-Se GSH-Px,具有修復氧化破壞的大分子如DNA、蛋白質等的功能。注意,GST催化的反應減少GSH含量,但是不增加GSSG含量。

GST催化GSHCDNB結合,其結合產物的光吸收峰波長為340nm;通過測定340nm波長處吸光度上升速率,即可計算出GST活性。

注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者 增加樣本量進行檢測。

 

產品組成:

產品名稱

產品規格

保存條件

試劑一

液體50mL×1

4℃

試劑二

液體45mL×1

4℃

試劑三

粉劑×1

4℃

溶液的配制:

試劑三:臨用前加5mL蒸餾水溶解。

 

需自備的儀器和用品:

紫外-可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、研缽/勻漿器、1mL石英比色皿和蒸餾水。

 

操作步驟:

一、樣本處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

1.        組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。8000g4℃離心10min,取上清置冰上待測。

2.        細菌、真菌:按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。

3.        血清等液體:直接測定。

二、測定步驟

1.        分光光度計預熱30min,調節波長到340nm,蒸餾水調零。

2.        試劑二放在25℃(一般物種)或者37℃(哺乳動物)保溫。

 

3.        空白管:取1mL石英比色皿,加入100μL試劑一,900μL試劑二和100μL試劑三,迅速混勻后于340nm測定10s吸光度記A125℃(一般物種)或者37℃(哺乳動物)水浴5min后,快速取出測定吸光度記A2

4.        測定管:取1mL石英比色皿,加入100μL上清液,900μL試劑二和100μL試劑三,迅速混勻后于340nm測定10s吸光度記A325℃(一般物種)或者37℃(哺乳動物)水浴5min后,快速取出測定吸光度記A4

三、GST計算公式:

(1)按蛋白濃度計算

活性單位定義:在25℃或者37℃中,每毫克蛋白每分鐘催化1μmol CDNBGSH結合為一個酶活性單位。

GSTU/mg prot=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷ε×d×106×V反總÷(Cpr×V)÷T

=0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷Cpr

(2)按樣本質量計算

活性單位定義:在25℃或者37℃中,每克樣本每分鐘催化1μmol CDNBGSH結合為一個酶活性單位。

GSTU/g 質量)=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×106×V反總÷(V÷V樣總×W)÷T

=0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷W

(3)按細胞數量計算

活性單位定義:在25℃或者37℃中,每104個細胞每分鐘催化1μmol CDNBGSH結合為一個酶活單位。

GSTU/104cell=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷ε×d×106×V反總÷(細胞數量×V÷V樣總)÷T

=0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷細胞數量

(4)按液體體積計算

活性單位定義:在25℃或者37℃中,每毫升液體每分鐘催化1μmol CDNBGSH結合為一個酶活單位。

GSTU/mL=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷ε×d×106×V反總÷V÷T

=0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)]

ε:產物摩爾消光系數,9.6×103 L/mol/cmd:比色皿光徑,1cm106:單位換算系數,1mol=1×106μmolV反總:反應體系總體積,1100μL=0.0011 LCpr:上清液蛋白質濃度(mg/mL),需要另外測定;V樣:加入反應體系中上清液體積,100μL=0.1mLT:反應時間,5minW:樣本質量,gV樣總:試劑一體積,1mL;細胞數量:以104為單位,萬。

 

注意事項:

1.        樣本處理等過程均需要在冰上進行,且須在當日測定酶活力。

2.        細胞中GST活性測定時,細胞數目須在300-500萬之間,細胞中GST的提取時可加試劑一后研磨或超聲波處理,不能用細胞裂解液處理細胞。

3.        若樣本測定吸光度大于1,建議對樣本用蒸餾水稀釋,計算時結果乘以稀釋倍數。

4.        測定反映的溫度對測定結果有影響,請控制在25℃或者37℃(哺乳動物)。

 

實驗實例:

1.        0.1g月季加入1mL試劑一進行冰浴勻漿,8000g4℃離心10min,取上清,稀釋50倍置冰上待測,按照測定步驟操作,測得計算ΔA測定管=A4-A3=0.647-0.587=0.06ΔA空白管=A2-A1=0.591-0.539=0.052,按樣本質量計算得: GSTU/g質量)=0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷W×50(稀釋倍數)=0.92U/g質量。

2.        0.1g肝加入1mL試劑一進行冰浴勻漿,8000g4℃離心10min,取上清,稀釋500倍置冰上待測,按照測定步驟操作,測得計算ΔA測定管=A4-A3=0.824-0.543=0.281ΔA空白管=A2-A1=0.591-0.539=0.052,按樣本質量計算得:GSTU/g質量)=0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷W×500(稀釋倍數)=263.35U/g質量。

 

 

 


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