多酚氧化酶（PPO）檢測試劑盒（鄰苯二酚微板法）

產品貨號：BA1542

產品規格：120T

產品簡介：

多酚氧化酶(polyphenol oxidase，PPO)是自然界中分布極廣的一種金屬蛋白酶，普遍存在于植物、真菌、昆蟲的質體中，甚至在土壤中腐爛的植物殘渣上都可以檢測到多酚氧化酶的活性，多酚氧化酶是一種蛋白體，在茶樹生命活動和茶葉加工過程中參與一系列由酶促活動而引起的化學變化，故又被稱為生物催化劑。該酶屬于細胞木質素合成途徑中間的關鍵酶，研究該酶可以探討多種生物細胞發育過程中木質素沉積的代謝機理，為減少水果石細胞含量提高其品質提供依據。

尚寶生物多酚氧化酶(PPO)檢測試劑盒(鄰苯二酚比色法)檢測原理是以鄰苯二酚作為底物，在酶促反應的最適條件下采用每隔一定時間測定產物生成量的方法，于酶標儀420nm處檢測吸光度，以吸光度變化所需酶量進行計算。該試劑盒主要用于植物組織的裂解液或勻漿液、血清等樣品中內源性的多酚氧化酶活性，尤其適用于檢測水果中多酚氧化酶活性。該試劑盒僅用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產品組成：

自備材料：

1.        蒸餾水

2.        研缽或勻漿器

3.        離心管或試管

4.        低溫離心機

5.        酶標板

6.        酶標儀

操作步驟：

1.        準備樣品：

①植物樣品：取2g植物組織或水果中層果肉加入4ml預冷的PPO Lysis buffer 研磨或勻漿，10000g，4℃離心 15-20min，留取上清液，-20℃凍存，用于多酚氧化酶的檢測。

②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定，-20℃凍存，用于多酚氧化酶的檢測。

③細胞或組織樣品：取恰當細胞或組織裂解液，如有必要用PPO Lysis buffer進行適當勻漿，10000g，4℃離心15-20min，取上清液，-20℃凍存，用于多酚氧化酶的檢測。

④高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的多酚氧化酶，可以使用PPO Lysis buffer稀釋進行恰當的稀釋。

2.        PPO加樣：按照下表設置對照孔、測定孔，注意：對照孔、測定孔中為同一待測樣品，但對照孔中為提前加熱煮沸5min的樣品。溶液應按照順序依次加入，并注意避免產生氣泡。如果樣品中的PPO活性過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定，樣品的檢測最好能設置2平行孔，求平均值。

3.        PPO 檢測：立即以酶標儀，以對照孔為對照，測定420nm處對照孔的吸光度(A測定0 )；1min后立即測定 420nm 處測定孔的吸光度(A測定1)。

計算：

PPO活性單位的定義：在該實驗條件下，每1min吸光度變化0.01所需酶量為一個活性單位。

組織樣本PPO(U)={(A_測定1 -A_測定0 )×V _T }/(W×V _S ×0.01×t)

式中：A_測定 1 =反應1min后測定孔的吸光度

A_測定 0 =加入PPO Assay buffer立即測定的測定孔吸光度

W=組織樣本的重量(g)

V_T =提取酶液的總體積(ml)

V_S =測定時所用酶液體積(ml)

液體樣本PPO(U)=(A_測定1 -A_測定0 )/(0.01×t)

式中：A_測定1 =反應1min后測定孔的吸光度

A_測定0 =加入PPO Assay buffer立即測定的測定孔吸光度

t=反應時間

注意事項：

1.        待測樣品中不能含有酶抑制劑，同時需避免反復凍融。

2.        PPO酶液提取時，注意低溫操作，防止酶活性。4℃保存2-3天，亦可-20℃保存。

3.        以煮沸的酶液為對照時，酶要充分失活。

4.        如果沒有酶標儀，也可以使用普通的分光光度計測定；每次檢測指標不宜過多，否則操作時間不一，有可能導致樣本間的差異。

有效期：6個月有效。