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超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測試劑盒

參  考  價:面議
具體成交價以合同協議為準
  • 型號

    BA1068-100

  • 品牌

    其他品牌

  • 廠商性質

    生產商

  • 所在地

    上海市

更新時間:2021-11-24 13:34:28瀏覽次數:146次

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供貨周期 現貨 規格 100管/48樣
貨號 BA1068-100 應用領域 化工,生物產業
超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測試劑盒
SOD(EC 1.15.1.1)是一種廣泛存在于生物體內的金屬酶,是重要的氧自由基清除劑,能催化超氧化物陰離子發生岐化作用,生成H2O2和O2。SOD不僅是超氧化物陰離子清除酶,也是H2O2主要生成酶,在生物抗氧化系統中具有重要作用。

超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測試劑盒(微量法)

注意:正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。

 

產品貨號:BA1068

 

產品規格:100/48

 

產品簡介:

SODEC 1.15.1.1)是一種廣泛存在于生物體內的金屬酶,是重要的氧自由基清除劑,能催化超氧化物陰離子發生岐化作用,生成H2O2O2SOD不僅是超氧化物陰離子清除酶,也是H2O2主要生成酶,在生物抗氧化系統中具有重要作用。

通過huang嘌呤及huang嘌呤氧化酶反應系統產生超氧陰離子(O2-)O2-可還原氮藍四唑生成藍色甲臜,后者在 560nm處有吸收;SOD可清除O2-,從而抑制了甲臜的形成;反應液藍色越深,說明SOD活性愈低,反之活性越高。

 

產品內容:

提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。

試劑一:液體5mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體100μL×1支,4℃保存;使用前先離心再吹打混勻。

試劑三:液體4mL×1瓶,4℃保存。

試劑四:粉劑×1支,4℃保存。(由于試劑量極少,容易產生誤差,現規格為0.0003g/支,使用時稱取0.00003g即可。)

試劑五:液體2mL×1瓶,4℃保存;臨用前將試劑四加入試劑五中,并震蕩溶解。

 

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

 

操作步驟:

一、樣品的前處理:

(1) 細菌、細胞或組織樣品的制備:

細胞、細菌樣本:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清,按照每500萬細菌或細胞加入1mL提取液,超聲波破碎(功率20%200w,超聲3s,間隔10s,重復30次)。8000g 4℃離心10分鐘,取上清,置冰上待測。

組織樣本:稱取約0.1g組織,加入1mL提取液進行冰浴勻漿; 8000g 4℃離心10分鐘,取上清,置冰上待測。

(2) 血清(漿)樣品:直接檢測。

 二、測定步驟:

1、分光光度計/酶標儀預熱30min以上,調節波長至560nm,蒸餾水調零。

2、測定前將試劑一、三和五37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴5min以上。

3、樣本測定(按順序加入下列試劑)

試劑名稱(μL

測定管

對照管

空白管1

空白管2

樣本

18

18

-

-

試劑一

45

45

45

45

試劑二

2

-

2

-

試劑三

35

35

35

35

蒸餾水

90

92

108

110

試劑五

10

10

10

10

充分混勻,37℃水浴30min后,560nm處測定各管吸光值A。計算ΔA測定=A測定-A對照,ΔA空白=A1-A2。如底部有沉淀,混勻后再行測定。

注意:

1、樣本和試劑二使用時在冰上放置。

2、樣本較多時,可按表格配置工作液(包含試劑一、二、三),試劑五必須最后加入。

3、空白管1和空白管2各只需做1~2管;每個樣本有一個對照管。

4、反應完成后,可能有沉淀生成,混勻后測定即可。

三、SOD活性計算:

1、抑制百分率的計算

抑制百分率=(ΔA空白-ΔA測定) ÷ΔA空白× 100%

盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內,越靠近50%越準確。如果計算出來的抑制百分率小于30%或大于70%,則通常需要調整加樣量后重新測定。如果測定出來的抑制百分率偏高,則需適當稀釋樣品;如果測定出來的抑制百分率偏低,則需重新準備濃度比較高的待測樣品。

2SOD酶活性單位:在上述huang嘌呤氧化酶藕聯反應體系中抑制百分率為50%時,反應體系中的SOD酶活力定義為一個酶活力單位。

3SOD酶活性計算:

1)血清(漿)SOD活性(U/mL)=[抑制百分率÷( 1-抑制百分率)×V反總]÷V×F

=11.11×抑制百分率÷( 1-抑制百分率)×F

2)組織、細菌或培養細胞SOD活力計算:

A:按樣本蛋白濃度計算

SOD活性 (U/mg prot)=[抑制百分率÷1-抑制百分率)×V反總V×Cpr×F

=11.11×抑制百分率÷( 1-抑制百分率) ÷Cpr×F

B:按樣本鮮重計算

SOD活性 (U/g 鮮重)=[抑制百分率÷(1 -抑制百分率)×V反總]÷(W×V÷V樣總)×F

=11.11×抑制百分率÷( 1-抑制百分率) ÷W×F

C:按細菌或細胞個數計算

SOD =活力 (U/104 cell)= [抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反總]÷(500×V÷V樣總)×F

=0.022×抑制百分率÷( 1-抑制百分率)×F

V反總:反應體系總體積,0.2mLV樣:加入反應體系中樣本的體積,0.018mLV樣總:加入提取液體積,1mLCpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣品質量,g500:細胞或細菌總數,500萬,F:樣本稀釋倍數。

 


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