超氧陰離子自由基檢測試劑盒(磺胺比色法)

產品貨號：BA1541

產品規格：50T

產品簡介：

超氧陰離子自由基作為生物體代謝過程中產生的一種自由基，可攻擊生物大分子，如脂 質、蛋白質、核酸和聚不飽和脂肪酸等，使其交鏈或者斷裂，引起細胞結構和功能的破壞， 與機體衰老和病變有很密切的關系，清除超氧陰離子自由基的研究已經得到了廣泛的關注。 生物體內的分子氧可以經過單電子還原轉變為超氧陰離子自由基(O2-)，超氧陰離子自由基 既可以直接作用于蛋白質和核酸等大分子，也可以衍生為羥自由基、單線態氧、過氧化氫及 脂質過氧物自由基等對細胞結構和功能具有破壞作用的活性氧。

超氧陰離子自由基檢測試劑盒(磺胺比色法)又稱超氧陰離子清除能力檢測試劑盒，其檢測原理是利用羥胺氧化的方法可以檢測生物體系中超氧陰離子自由基(O2-)，即 超氧陰離子自由基(O2-)與羥胺反應生成NO2-，NO2-在氨基苯磺酸和萘胺作用下反應生成粉 紅色的偶氮物質對-苯磺酸-萘胺，以分光光度計測定530nm處吸光度，在一定范圍內顏色 深淺與超氧陰離子自由基(O2-)成正比，根據NO2-反應的標準曲線將A₅₃₀換算成NO2-濃度， 再依據上述關系式即可計算出O2-濃度，該試劑盒主要用于測定植物組織中的超氧陰離子自 由基含量或超氧陰離子清除能力。該試劑盒僅用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產品組成：

自備材料：

1、蒸餾水。

2、實驗材料：植物組織(大豆、綠豆、玉米等葉片)、血液、組織樣本等。

3、研缽或勻漿器。

4、離心管或試管。

5、低溫離心機。

6、恒溫箱或水浴鍋。

7、比色杯。

8、分光光度計。

操作步驟：（僅供參考）

1、準備樣品：

①植物樣品：取正?；蚰婢诚碌男迈r植物組織，清洗干凈，擦干，切碎，迅速稱取1~1.5g，加入2ml預冷的O2- Lysis buffer后冰浴條件下勻漿或研磨，4℃ 10000g 離心10min，上清液即為超氧陰離子自由基提取液，4℃保存備用。

②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定，4℃保存，用于超氧陰離子自由基的檢測。

③高活性樣品：如果樣品中含有較高濃度的超氧陰離子自由基，可以使用O2 - Lysis buffer進行恰當的稀釋。

2、配制系列NO2-標準溶液：取出NO2-標準(1mM)恢復至室溫后，NO2-標準(1mM)按下表繼續稀釋：

3、O2-加樣：按照下表設置空白管、標準管、測定管，溶液應按照順序依次加入，并注意避免產生氣泡。如果樣品中的超氧陰離子自由基濃度過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定，樣品的檢測最好能設置平行管。

4、O2-測定：以空白調零，比色杯光徑1cm，分光光度計測定標準管、測定管530nm處吸光度(即為A標準、A測定)。

計算：

以系列NO2-標準(1~6號)含量(μM)為橫坐標，以對應的吸光度為縱坐標，制作標準曲線，根據測定管的吸光度進而計算NO2-含量。根據如下公式計算具體樣品中超氧陰離子自由基(O2-)的含量：

植物組織樣品 O2-(μM/g)=2×n×VT/(W×VS)

式中：2=NO2-與 O2-間的化學計量數；

n=從標準曲線上查得的NO2-含量(μM) VT=超氧陰離子自由基提取液總體積(ml) W=樣品鮮重(g) VS=測定時加入提取液體積(ml)

血清、尿液等樣品O2-(μM/ml)=2×n×N/VS

式中：2=NO2-與O2-間的化學計量數

n=從標準曲線上查得的 NO2-含量(μM) N=稀釋倍數VS=測定時加入提取液體積(ml)

注意事項 ：

1、 實驗材料應盡量新鮮，如取材后不立即使用，應存于4℃。

2、 如果樣品中含有較多的葉綠素，會干擾測定結果，可在加入羥胺溶液25℃水浴孵育20min后用等體積yi醚萃取葉綠素，再行顯色反應。

3、 如果沒有分光光度計，也可以使用普通的酶標儀測定，但應考慮酶標儀的最大檢測體 積。

4、 所測樣本的濃度過高，應用O2- Lysis buffer 稀釋樣品后重新測定。

有效期：6個月有效，4℃運輸，4℃保存。