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丙二醛(MDA)含量檢測試劑盒(微量法)

參  考  價:面議
具體成交價以合同協議為準
  • 型號

    BA1066-100

  • 品牌

    其他品牌

  • 廠商性質

    生產商

  • 所在地

    上海市

更新時間:2021-11-24 14:04:04瀏覽次數:221次

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供貨周期 現貨 規格 100管/96樣
貨號 BA1066-100 應用領域 化工,生物產業
丙二醛(MDA)含量檢測試劑盒(微量法)
氧自由基作用于脂質的不飽和脂肪酸,生成過氧化脂質;后者逐漸分解為一系列復雜的化合物,其中包括丙二醛 MDA。通過檢測 MDA 的水平即可檢測脂質氧化的水平。

丙二醛(MDA)含量檢測試劑盒(微量法)

正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定。

產品貨號:BA1066

產品規格:100/96

產品內容:

提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;

試劑一:液體30mL×1瓶,4℃保存;

試劑二:粉劑×2瓶,4℃保存;

MDA檢測工作液的配制:用時在每瓶試劑二中加入15mL試劑一,溶解混勻,4℃保存待用。

試劑三:液體10mL×1瓶,4℃保存;

注意事項:MDA檢測工作液較難溶解,可以70℃加熱,并劇烈振蕩以促進溶解。或者通過超聲處理以促進溶解。

產品說明:

氧自由基作用于脂質的不飽和脂肪酸,生成過氧化脂質;后者逐漸分解為一系列復雜的化合物,其中包括丙二醛 MDA。通過檢測 MDA 的水平即可檢測脂質氧化的水平。

丙er醛(MDA)在酸性和高溫條件下,可以與硫代ba比妥(thiobarbituric acidTBA)縮合,生成棕紅色的san甲川(3,5,5-san甲基惡唑-24-er酮),其最大吸收波長在532nm。進行比色后可估測樣品中過氧化脂質的含量。但是測定植物組織中MDA時受多種物質的干擾,其中最主要的是可溶性糖,糖與TBA顯色反應產物的最大吸收波長在450nm,但532nm處也有吸收。所以同時測定600nm532nm450nm下的吸光度,利用532nm450nm600nm下的吸光度的差值計算MDA的含量。

由于植物中受蔗糖干擾較大,動物中受葡萄糖干擾較大,所以本試劑盒有針對蔗糖和葡萄糖的兩個公式。若所測樣品為油脂類物質,則兩個公式均可。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

操作步驟:

一、MDA提取:

1、細菌或細胞樣品的制備:收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照每400萬細菌或細胞加入1mL提取液,超聲波破碎細菌或細胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

2. 組織樣品的制備:稱取約0.1g組織,加入1mL提取液進行冰浴勻漿;8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

二、測定操作:

1、可見分光光度計/酶標儀預熱30min以上,蒸餾水調零。

2、按下表步驟加樣:

試劑名稱

測定管

MDA檢測工作液(μL

300

樣本(μL

100

試劑三(μL

100

混合液在100℃水浴中保溫30min后(蓋緊,防止水分散失),置于冰浴中冷卻,10000g,常溫,離心10min。吸取200uL上清液于微量玻璃比色皿或96孔板中,測定各樣品在450nm532nm600nm處的吸光度。

三、MDA含量計算:

a. 96孔板計算

1、細菌、細胞或動物組織中MDA含量計算

1)按照蛋白濃度計算

MDA含量(nmol/ mg prot=12.9×A532-A600-2.58×A450×V÷Cpr×V樣本)

=5×12.9×A532-A600-2.58×A450÷Cpr

2)按照樣品質量計算

MDA 含量(nmol/ g 鮮重)=12.9×A532-A600-2.58×A450×V÷W×V樣本÷V提取)

=5×12.9×A532 -A600-2.58×A450÷W

(3) 按照細菌或細胞密度計算:

MDA 含量(nmol/104 cell=12.9×A532-A600-2.58×A450×V÷400÷V提取×V樣本)

=0.125×12.9×A532-A600-2.58×A450

V總:反應體系總體積,0.5mLV樣品:加入樣品體積,0.1 mLCpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL W:樣品質量,g400:細胞或細菌總數,400萬;V提取:提取液體積,1mL

2、植物組織中MDA含量計算

1)按照樣品質量計算

MDA含量(nmol/ g鮮重)=12.9×A532-A600-1.12×A450×V÷W×V樣本÷V提取)

=5×12.9×A532-A600-1.12×A450÷W

2)按照蛋白濃度計算

MDA含量(nmol/ mg prot=12.9×A532-A600-1.12×A450×V÷Cpr×V樣本)

=5×12.9×A532-A600-1.12×A450÷Cpr

V總:反應體系總體積,0.5mLV樣品:加入樣品體積,0.1 mLCpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣品質量,gV提取:提取液體積,1mL

b. 按微量比色皿計算

1、細菌、細胞或動物組織中MDA含量計算

1)按照蛋白濃度計算

MDA含量(nmol/ mg prot=6.45 ×A532-A600-1.29×A450×V÷Cpr×V樣本)

=5×6.45 ×A532-A600-1.29×A450÷Cpr

2)按照樣品質量計算

MDA含量(nmol/ g鮮重)=6.45 ×A532-A600-1.29×A450×V÷W×V樣本÷V提取)

=5×6.45 ×A532-A600-1.29×A450÷W

(3) 按照細菌或細胞密度計算:

MDA 含量(nmol/104 cell=6.45 ×A532-A600-1.29×A450×V ÷400×V樣本÷V提取)

=0.0125×6.45 ×A532-A600-1.29×A450

V總:反應體系總體積,0.5mLV樣品:加入樣品體積,0.1 mLCpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣品質量,g400:細胞或細菌總數,400萬;V提取:提取液體積,1mL

2、植物組織中MDA含量計算

1)按照樣品質量計算

MDA含量(nmol/ g鮮重)=6.45 ×A532-A600-0.56×A450×V÷W×V樣本÷V提取)

=5×6.45 ×A532-A600-0.56×A450÷W

2)按照蛋白濃度計算

MDA含量(nmol/ mg prot=6.45 ×A532-A600-0.56×A450×V÷Cpr×V樣本)

=5×6.45 ×A532-A600-0.56×A450÷Cpr

V總:反應體系總體積,0.5mLV樣品:加入樣品體積,0.1 mLCpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣品質量,gV提取:提取液體積,1mL


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