菠蘿蛋白酶檢測試劑盒（福林酚微板法）

產品貨號: BA1567

產品規格: 100T

產品簡介：

菠蘿蛋白酶(Bromelain)簡稱菠蘿酶，亦稱鳳梨酶、鳳梨酵素等，是存在于菠蘿植株中的蛋白水解酶，可從菠蘿果莖、葉、皮提取出來，經精制、提純、濃縮、酶固定化、冷凍干燥而得到，菠蘿蛋白酶已被廣泛應用于食品、醫藥等行業。利用吸附力、離子鍵、共價鍵等不同的聯結方式，將酶與不溶性載體聯結，制成固定化酶，可以很好的避免酶的失活，易于儲存運輸。

菠蘿蛋白酶檢測試劑盒(福林微板法)檢測原理是通過蛋白酶催化底物酪蛋白，后者水解生成酪氨酸，酪氨酸含有酚羥基，可與福林試劑發生福林反應，即福林試劑在堿性條件下容易定量的被酚類化合物還原，生成鎢藍和鉬藍的混合物，呈現不同深淺的藍色。于酶標儀檢測吸光度，以吸光度的大小與酪氨酸含量的多少有關，吸光度大說明酪氨酸含量高，也就是說菠蘿蛋白酶分解的酪蛋白多，酶活性高。該試劑盒主要用于植物組織尤其時菠蘿的勻漿液中菠蘿蛋白酶活性，尤其適用于檢測菠蘿中菠蘿蛋白酶活性。該試劑盒僅用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產品組成：

自備材料：

1.        蒸餾水

2.        研缽或勻漿器

3.        離心管

4.        離心機

5.        酶標板

6.        酶標儀

操作步驟（僅供參考）：

1.        準備樣品：?

①植物樣品：取菠蘿肉或植物組織，切碎后在研缽或勻漿器中加入等體積組織勻漿液進行研磨或勻漿，靜置，濾紙過濾或紗布過濾。留取濾液，邊攪拌邊加入Bromelain?Lysis?buffer，攪拌，靜置。離心，棄上清液，收集沉淀，加入Bromelain洗脫液，攪拌洗脫。離心，取上清液，凍存，用于菠蘿蛋白酶的檢測。?

②固定化酶：稱取適量的固定化酶，溶解于組織勻漿液，混勻，待用。?

③高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的菠蘿蛋白酶，可以使用蒸餾水或組織勻漿液進行恰當的稀釋。

2.        制作酪氨酸標準：取適量的酪氨酸標準，按下表配制不同濃度的酪氨酸標準備用。

3.        處理待測樣品：取兩支離心管，分別加入待測樣品。一支置于孵育后加入提前孵育的酪蛋白溶液，混勻，準確孵育，立即加入酪蛋白終止液，迅速搖勻滅活，作為測定液。同時取另一支直接加入酪蛋白終止液，迅速搖勻滅活，加入提前孵育的酪蛋白溶液，混勻，準確孵育，作為對照液。以上兩支含有測定液和對照液的離心管室溫放置。離心，分別取上清液待用。

4.        加樣：按照下表設置對照孔、標準孔、測定孔。溶液應按照順序依次加入，并注意避免產生氣泡。如果樣品中的菠蘿蛋白酶活性過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定。樣品的檢測最好能設置平行管，求平均值。

5.        菠蘿蛋白酶檢測：充分混勻，孵育顯色，立即以酶標儀，以對照孔為對照，測定測定孔的吸光度。同時以酪氨酸標準0號孔為空白對照，測定系列酪氨酸標準(1-5號孔)的吸光度。

計算：

以酪氨酸濃度(mg/ml)為橫坐標，以對應的吸光度值為橫坐標，繪制酪氨酸標準曲線。通過橫坐標的吸光度值，在標準曲線上查得各測定孔中酪氨酸濃度(mg/ml)。

菠蘿蛋白酶活性單位的定義：在該實驗條件下，水解酪蛋白產生酪氨酸所需的酶量為一個活性單位。其比活力定義：其每毫克蛋白所含蛋白酶活力單位得數量。

菠蘿蛋白酶(U)={測定管酪氨酸濃度×2×1000}/15

注意事項:

1.        待測樣品中不能含有酶抑制劑，同時需避免反復凍融。

2.        菠蘿蛋白酶提取時，注意低溫操作，防止酶活性，亦可-20℃保存。

3.        如果沒有分光光度計，也可以使用普通的酶標儀測定。每次檢測指標不宜過多，否則操作時間不一，有可能導致樣本間的差異。

4.        離心時最好采用低溫離心機，常溫離心機也可。

有效期：6個月有效。