當前位置:上海尚寶生物科技有限公司>>試劑盒>>生化試劑盒>> BA1016-100α-葡萄糖苷酶(α-GC)活性檢測試劑盒
供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100管/48樣 |
---|---|---|---|
貨號 | BA1016-100 | 應用領域 | 化工,生物產業 |
α-葡萄糖苷酶(α-GC)活性檢測試劑盒(微量法)
注意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
產品貨號:BA1016
產品規格:100管/48樣
產品內容:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前每瓶加入12mL雙蒸水,充分溶解備用;用不完的試劑仍-20℃保存。
試劑二:液體15mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體15mL×1瓶,4℃保存。
標準品:液體×1支,5μmol/mL的對硝基苯酚溶液。
產品說明:
α-GC(EC 3.2.1.20)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,催化水解芳基或烴基與糖基之間的α-糖苷鍵生成葡萄糖,不僅與細胞壁的松弛或加固有關,而且與細胞識別和一些信號分子產生密切相關。
α-GC 分解對-硝基苯-α-D 吡喃葡萄糖苷生成對-硝基苯酚,后者在400nm有最大吸收峰,通過測定吸光值升高速率來計算α-GC 活性。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、粗酶液提取:
1、細菌或培養細胞的處理:收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照每1000萬細菌或細胞加入1mL提取液,超聲波破碎細菌或細胞(功率20%,超聲3秒,間隔10秒,重復30次),15000g,4℃,離心20min,取上清,置冰上待測。
2、組織的處理:稱取約0.2g組織,加入1mL提取液進行冰浴勻漿;15000g,4℃,離心20min,取上清,置冰上待測。
3、標準樣品的準備:取100μL標準液,加入到400μL 試劑三中,得到1μmol/mL標準液,十倍稀釋到100nmol/mL,用蒸餾水倍比稀釋:50、25、12.5、6.25、0 nmol/mL。100、50、25、12.5、6.25、0 nmol/mL做標準液。
二、測定步驟和加樣表:
1. 分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至400nm,蒸餾水調零。
2. 加樣表
試劑名稱(µL) | 測定管 | 對照管 | 標準管 |
試劑一 | 100 | ||
蒸餾水 | 150 | 150 | |
試劑二 | 30 | 30 |
充分混勻,放入37℃準確水浴30min后,立即放入沸水浴中煮沸5min(蓋緊,以防止水分散失),流水冷卻后充分混勻(以保證濃度不變)
試劑一 | 100 | ||
充分混勻,8000g,4℃,離心5min,取上清液(在EP管或96孔板中加入下列試劑) |
充分混勻,8000g,4℃,離心5min,取上清液(在EP管或96孔板中加入下列試劑)
上清液 | 70 | 70 | |
標準液 | 70 | ||
試劑三 | 130 | 130 | 130 |
充分混勻,室溫靜置2min后, 400nm處測定吸光值A,計算ΔA=A測定管-A對照管。
三、α-GC 活力計算:
1、標準曲線建立:根據標準管的濃度(y)和吸光度(x,各標準管減去濃度為0的標準管為標準管A),建立標準曲線。
2、根據標準曲線,將ΔA(x)帶入公式計算樣品產物濃度(nmol/mL)。
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白在每mL體系中每小時產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。
GC 活力(U/mg prot)=(y×V反總)÷(V樣×Cpr)÷T=18.67×y÷Cpr
需要另外測定,建議使用本公司 BCA 蛋白質含量測定試劑盒。
(2)按樣本鮮重計算:
單位的定義:每g組織在每mL體系中每小時產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。
GC 活力(U/g鮮重) = (y×V反總)÷(W×V樣÷V樣總)÷T=18.67×y÷W
(3)按細菌或細胞數量計算:
單位的定義:每1萬個細菌或細胞在每mL體系中每小時產生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。
GC 活力(U/104 cell)=(y×V反總)÷(1000×V樣÷V樣總)÷T=0.0187×y
Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;V反總:反應體系總體積,0.28mL;V樣:加入反應體系中樣本體積,0.03mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;W:樣品質量,g;1000:細胞或細菌總數,1000萬;T:反應時間,0.5h。
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼
以上信息由企業自行提供,信息內容的真實性、準確性和合法性由相關企業負責,化工儀器網對此不承擔任何保證責任。
溫馨提示:為規避購買風險,建議您在購買產品前務必確認供應商資質及產品質量。