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上海尚寶生物科技有限公司
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活性氧(羥自由基)測(cè)定試劑盒(比色法)

參  考  價(jià):620
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 型號(hào)

    BA1789

  • 品牌

    其他品牌

  • 廠商性質(zhì)

    生產(chǎn)商

  • 所在地

    上海市

規(guī)格

50T 620元 999盒可售

更新時(shí)間:2022-02-17 15:20:29瀏覽次數(shù):289次

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貨號(hào) BA1789 應(yīng)用領(lǐng)域 化工,生物產(chǎn)業(yè)
活性氧(羥自由基)測(cè)定試劑盒(比色法)
Fenton反應(yīng)是常用的產(chǎn)生羥自由基的化學(xué)反應(yīng),H2O2的量和Fenton反應(yīng)產(chǎn)生的OH-量成正比,當(dāng)給予電子受體后,通過(guò)griess試劑顯色,生成紅色物質(zhì),其呈色程度與OH-的多少成正比。

活性氧(羥自由基)測(cè)定試劑盒(比色法)

產(chǎn)品貨號(hào):BA1789

 

產(chǎn)品規(guī)格:50T

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

Fenton反應(yīng)是常用的產(chǎn)生羥自由基的化學(xué)反應(yīng),H2O2的量和Fenton反應(yīng)產(chǎn)生的OH-量成正比,當(dāng)給予電子受體后,通過(guò)griess試劑顯色,生成紅色物質(zhì),其呈色程度與OH-的多少成正比。

 

產(chǎn)品組成:

試劑

KGT010

50 assays

保存條件

A標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)存液(3% H2O2

0.5ml

2-8℃

B底物儲(chǔ)存液

1ml

試劑C-1

2ml

試劑C-2

7ml×2

試劑D

10ml

試劑E

30ml

2-8℃,避光

試劑F

30ml

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

注意:

1. 0.03%標(biāo)準(zhǔn)品工作液的配制:3%H2O2標(biāo)準(zhǔn)貯備液:蒸餾水=1:99稀釋,現(xiàn)用現(xiàn)配。

2. 底物工作液的配制:

 若您的樣本為抑制羥自由基﹡,即測(cè)定管吸光度對(duì)比照管吸光度低,則底物工作液的配制:底物貯備液:                       蒸餾水=1:99稀釋,現(xiàn)用現(xiàn)配。

 若您的樣本為產(chǎn)生羥自由基﹡,即測(cè)定管吸光度對(duì)比照管吸光度高,則底物工作液的配制:底物貯備液:蒸餾水=1:299稀釋,現(xiàn)用現(xiàn)配。

注﹡:抑制羥自由基的物質(zhì)如:血清(漿),各種組織勻漿液,天然維生素等;

產(chǎn)生羥自由基的物質(zhì)如:中性白細(xì)胞,某些藥物,部分植物提取物等。

3. 試劑C工作液的配制:C-1工作液(試劑C-1用時(shí)加蒸餾水1:9稀釋成工作液,2-8℃保存)與C-2液等比例混合,用多少配多少,余下2-8℃保存。

4. 試劑D用時(shí)加蒸餾水稀釋至100ml,得試劑D工作液,2-8℃保存。

如結(jié)晶,則置37℃水浴中至全部溶解后再稀釋。

5. 顯色劑的配制:試劑D工作液:試劑E:試劑F:冰乙酸=8:3:3:2,需多少配多少,現(xiàn)用現(xiàn)配。

 

操作步驟:

以上配制好的工作液,在37℃水浴中預(yù)熱3分鐘,以下操作在37℃水浴中進(jìn)行:

 

 

 


標(biāo)準(zhǔn)空白管

標(biāo)準(zhǔn)管

對(duì)照管

測(cè)定管

蒸餾水(ml

0.4

0.2

0.2


0.03%H2O2標(biāo)準(zhǔn)工作液(ml


0.2



底物工作液(ml



0.2

0.2

樣本*(ml)




0.2

試劑C工作液(ml

0.4

0.4

0.4

0.4

混勻,37℃反應(yīng)1分鐘,加完試劑C開(kāi)始計(jì)時(shí)一分鐘,立即加入顯色劑終止反應(yīng),一次只能做一只管子。

顯色劑(ml

2

2

2

2

混勻,室溫放置20分鐘后,1cm光徑,550nm,蒸餾水調(diào)零,測(cè)各管吸光度值。

*:參考取樣量:血清(漿)樣本用生理鹽水20倍稀釋后取0.2ml作檢測(cè);或直接取10μL血清(漿),再加190μL 生理鹽水。0.5%組織樣本,取0.2ml檢測(cè)。具體取樣量需您自己做預(yù)試確定,詳細(xì)預(yù)試方法見(jiàn)附件。

 

計(jì)算方法及舉例: 

(一)血清(漿)中抑制羥自由基能力的計(jì)算:

1. 定義:規(guī)定每毫升血清(漿)在37℃下反應(yīng)1分鐘,使反應(yīng)體系中H2O2濃度降低1mmol/L為一個(gè)抑制羥自由基能力單位。

2. 公式:

抑制羥自由基能力(U/ml)=×標(biāo)準(zhǔn)管濃度(8.824mM)××樣本測(cè)試前稀釋倍數(shù)

3. 計(jì)算舉例:

取用生理鹽水20倍稀釋后的血清0.2ml檢測(cè)抗活性氧能力,測(cè)得對(duì)照管吸光度OD值為0.671, 測(cè)定管吸光度OD值為0.349,標(biāo)準(zhǔn)管吸光度OD值為0.443,空白管吸光度OD值為0.001,標(biāo)準(zhǔn)H2O2濃度為8.824mmol/L,則計(jì)算如下:

 抑制羥自由基能力(U/ml) =×8.824××20=642.83U/ml血清′ ′ = - =

(二)組織中抑制羥自由基能力的計(jì)算:

1. 定義:規(guī)定每毫克組織蛋白在37℃下反應(yīng)1分鐘,使反應(yīng)體系中H2O2濃度降低1mmol/L為一個(gè)抑制羥自由基能力單位。

2. 公式:

抑制羥自由基能力(U/mgprot)=×標(biāo)準(zhǔn)管濃度(8.824mM)÷ (蛋白毫克數(shù)/ml ×取樣量)

3. 計(jì)算舉例:

5%小鼠肝組織勻漿0.1ml用生理鹽水10倍稀釋成0.5%肝勻漿,取0.2ml檢測(cè),測(cè)得對(duì)照管OD0.843,測(cè)定管OD0.418,標(biāo)準(zhǔn)管OD0.434,標(biāo)準(zhǔn)空白OD0.007,標(biāo)準(zhǔn)濃度為8.824mmol/L0.5%小鼠肝勻漿的蛋白為0.486mg/ml′ ? ′ = - =

抑制羥自由基能力(U/mgprot)=×8.824÷ (0.486 ×0.2)= 90.36U/mgprot

(三)溶血液中抑制羥自由基能力的計(jì)算:

1. 定義:規(guī)定每毫克組織蛋白在37℃下反應(yīng)1分鐘,使反應(yīng)體系中H2O2濃度降低1mmol/L為一個(gè)抑制羥自由基能力單位。

2. 公式:

抑制羥自由基能力(U/mgHb)=×標(biāo)準(zhǔn)管濃度(8.824mM)××樣本測(cè)試前稀釋倍數(shù)÷血紅蛋白含量(mgHb/ml)

3. 計(jì)算舉例:

取抗凝紅細(xì)胞0.2ml加蒸餾水0.8ml,漩渦混勻器充分混勻1分鐘制得溶血液,同時(shí)測(cè)定血紅蛋白為 41.182mgHb/ml。取0.01ml溶血液加5.99ml雙蒸水,充分混勻后取0.2ml按操作表進(jìn)行檢測(cè), 測(cè)得對(duì)照管OD0.837,測(cè)定管OD0.648,標(biāo)準(zhǔn)管OD0.504,標(biāo)準(zhǔn)空白OD0.016,標(biāo)準(zhǔn)濃度為8.824mmol/L,則計(jì)算結(jié)果為:

抑制羥自由基能力(U/mgHb)=×8.824××600÷41.182=248.96U/mgHb′′ ′ ′ ? = - =

(四)產(chǎn)生羥自由基能力的計(jì)算:

1. 定義:規(guī)定每毫升、每毫克或每立方厘米內(nèi)106個(gè)細(xì)胞在本反應(yīng)體系中使反應(yīng)液中H2O2濃度增加1mmol/L為一個(gè)產(chǎn)生羥自由基能力單位。

2. 公式:

產(chǎn)生羥自由基能力(U/ml)=×標(biāo)準(zhǔn)管濃度(8.824mM)××樣本測(cè)試前稀釋倍數(shù)

3. 計(jì)算舉例:

某種藥物稀釋10倍后取0.2ml檢測(cè),結(jié)果如下:標(biāo)準(zhǔn)空白管OD0.009,標(biāo)準(zhǔn)管OD0.440, 測(cè)得對(duì)照管OD0.217,測(cè)定管OD0.621。則計(jì)算如下:

產(chǎn)生羥自由基能力(U/ml)=×8.824××10=413.56U/ ml

 

注意事項(xiàng):

1. 必須每一只管子單獨(dú)做,并且反應(yīng)時(shí)間一分鐘一定要準(zhǔn)確。

2. 必須嚴(yán)格按照操作表順序加試劑,不可配制混合試劑。

3. 檢測(cè)樣本溶劑或介質(zhì)可為生理鹽水,蒸餾水,醋酸,無(wú)水乙醇,但不能為磷酸緩沖液。

4. 此法檢測(cè)靈敏度較高,檢測(cè)血清(漿)和組織以外樣本時(shí),最好先取原液及不同濃度稀釋后的樣本,例如5倍稀釋液或10倍稀釋液做預(yù)試。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

附件: 羥自由基最佳取樣濃度及最佳取樣量預(yù)試驗(yàn)方法

 

一.樣本處理:

1. 血清(漿):用生理鹽水將血清(漿)按1:11:41:91:19 等稀釋成一系列不同濃度的血清(漿),分別取不同濃度的血清(漿)0.1ml按血清(漿)的測(cè)定操作進(jìn)行測(cè)定。

2. 組織勻漿,細(xì)胞,線粒體或細(xì)胞膜等組織:分別用生理鹽水將組織勻漿等稀釋成10%5%2%1%0.5%0.1%等一系列不同濃度的組織勻漿,分別取不同濃度的組織勻漿0.2ml按組織的測(cè)定操作進(jìn)行檢測(cè)。

二.操作步驟舉例: 

(一) 血清(漿)最佳取樣濃度及最佳取樣量預(yù)試驗(yàn)方法舉例:

1. 樣本:以正常組大鼠眼眶取全血,肝素抗凝取血漿測(cè)活性氧為例。

2. 樣本稀釋:用生理鹽水將血清(漿)按1:11:41:91:19等稀釋成一系列不同濃度的血清(漿),分別取不同濃度的血清(漿)0.2ml按血清(漿)的測(cè)定操作進(jìn)行測(cè)定。

3. 操作表:


標(biāo)準(zhǔn)空白管

標(biāo)準(zhǔn)管

對(duì)照管

測(cè)定管

蒸餾水(ml

0.4

0.2

0.2


0.03%H2O2標(biāo)準(zhǔn)工作液(ml


0.2



試劑B(底物工作液)(ml



0.2

0.2

樣本*(ml)




0.2

試劑Cml

0.4

0.4

0.4

0.4

混勻,37℃反應(yīng)1分鐘,加完試劑C開(kāi)始計(jì)時(shí)一分鐘,立即加入顯色劑終止反應(yīng),一次只能做一只管子。

顯色劑(ml

2

2

2

2

混勻,室溫放置20分鐘后,1cm光徑,550nm,蒸餾水調(diào)零,測(cè)各管吸光度值。

4. 預(yù)試結(jié)果:


空白

標(biāo)準(zhǔn)

對(duì)照

1:1

1:4

1:9

1:19

1:49

1:99

吸光度值

0.001

0.443

0.671

0.090

0.113

0.161

0.349

0.579

0.633

抑制率




86.59%

83.16%

76.01%

47.99%

13.71%

5.66%

  

5. 結(jié)論:

從上面的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)可以看出,抑制率(抑制率= ×100%45%~55%之間的最佳取樣濃度為1:19

1:19稀釋正常組大鼠血漿0.2ml進(jìn)行羥自由基正式檢測(cè)。

 

三.討論

在您進(jìn)行正式檢測(cè)前,需要從每組中取23個(gè)樣本進(jìn)行上面的預(yù)試實(shí)驗(yàn),確定最佳濃度和最佳取樣量。在保證抑制率( 抑制率= ×100%)在2050%間的同時(shí),每組之間也應(yīng)該有所差異,如果您有疑問(wèn),則需要重新摸索最佳濃度和最佳取樣量。


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