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供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50T/100T |
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貨號 | 26123 | 應用領域 | 化工,生物產業 |
昆蟲蛋白提取試劑盒
產品貨號:26123
產品規格:50T/100T
產品簡介:
昆蟲組織蛋白提取試劑盒適用于從各種昆蟲類細胞、組織中提取總蛋白。提取過程簡單方便,可在1小時內完成。該試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物,阻止了蛋白酶對蛋白的降解,為提取高純度的蛋白提供了保證。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。
產品特點:
1. 使用方便,從昆蟲類細胞,組織中提取蛋白不需經過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。
2. 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
3. 含蛋白穩定劑,提取的蛋白穩定。
4. 紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。
5. 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含7種獨立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。
該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
試劑盒以外自備試劑和儀器:
移液器、吸頭、離心機及離心管、渦旋振蕩器、冰箱,冰盒。
使用方法:
1. 提取液制備:每500μl冷的昆蟲蛋白提取液中加入2μl蛋白酶抑制劑混合物,4μl蛋白穩定劑,混勻后置冰上備用。
2. 取100mg昆蟲組織樣本剪碎①,加入昆蟲蛋白提取液。
3. 用勻漿機/勻漿器充分勻漿。也可用液氮研磨后加入蛋白提取液。
4. 將勻漿在4℃條件下振蕩15-20分鐘。
【注】
(1)較低轉速保持提取液在晃動即可。
(2)沒有振蕩條件也可以不振蕩,保持靜置,稍微延長靜置時間,中間每隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
5. 在4℃,12000g條件下離心10分鐘。
6. 在上清吸入另一預冷的干凈離心管,即可得到昆蟲總蛋白。
7. 將上述蛋白提取物定量②后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗③。
注:
①用液氮研磨的方法更佳,具體方法可以聯系本公司索取詳細資料。
②建議用BCA法進行蛋白定量。
③蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被細菌污染。
常見問題分析:
1. 蛋白濃度低?
處理部分組織樣本時可能沒有裂解*,導致蛋白濃度低。只要適當延長提取液的處理時間即可。最好在持續振蕩的條件下處理,沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
2. 用什么方法定量蛋白?
建議用BCA法。不適合用Bradford法,因為提取液中含有干擾Bradford法的組份,導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系,則可以用Bradford法定量。
3. 提取時出現膠裝沉淀?
蛋白提取液處理產物中有時會出現少量透明膠狀物,屬正常現象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。不檢測和基因組DNA結合特別緊密的特定蛋白的情況下,可以直接離心取上清進行后續實驗即可;如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理,300w/10秒間隔10秒,超聲3分鐘,隨后離心取上清用于后續實驗。檢測一些常見的轉錄因子,例如NF-kappaB、p53等時,不必進行超聲處理。
4. 提取的蛋白具有活性嗎?
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份,不破壞蛋白的結構,沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞,蛋白均保持其天然構象和活性。
使用注意事項:
1. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內壁上的液體甩至管底,避免開蓋時液體灑落。
2. 實驗過程中的所有試劑須預冷;所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
3. 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀,不影響使用,溶解后正常使用。
4. 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
5. Western實驗內參可以選用beta-actin、GAPDH、Tubμlin。
6. 更多蛋白提取常見問題分析等資料可以聯系本公司索取。
注意事項:
1. 本試劑盒僅供科學研究使用,不可用于診斷或治療。
2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內壁上的液體離心至管底,避免開蓋時試劑損失。
3. 禁止與其他品牌的試劑混用,否則會影響使用效果。
4. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
5. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
保存條件:
蛋白酶抑制劑-20℃保存;蛋白穩定劑、蛋白提取液2-8℃保存。一年有效。
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