細胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒

產品貨號：BA1801

產品規格：100T

產品簡介：

細胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒(Senescence β-Galactosidase Staining Kit)是一種基于衰老時衰老相關β-半乳糖苷酶(senescence-associated β-galactosidase; SA-β-Gal)活性水平上調而對衰老細胞或組織進行染色檢測的試劑盒。在普通的光學顯微鏡下就可以觀測到細胞或組織的衰老情況。本試劑盒可以用于培養細胞的衰老檢測，也可以用于冰凍切片的衰老檢測。

絕大多數正常細胞被認為僅有有限的分裂能力，在不能分裂后就進入衰老(senescence)狀態。此時細胞仍然是存活的，但細胞的基因和蛋白的表達譜發生了很大改變。衰老的細胞不能在一些常規的刺激下再誘導細胞分裂，并且衰老細胞的細胞周期分布也比較特殊，不同于一些損傷誘導的細胞休眠，也不同于細胞生長接觸抑制的情況。衰老細胞通常體積變大，并表達在pH6.0時有高酶活性的β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)。細胞衰老也被認為是生物體抑制腫瘤的一種方式，同時也是生物體老化(aging)的一種潛在原因。

尚寶生物生產的細胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒，以X-Gal為底物，在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下會生成深藍色產物。從而在光學顯微鏡下很容易觀察到變成藍色的表達β-半乳糖苷酶的細胞或組織。本產品染色的染色效果請參考圖1。

圖1. 細胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒用于MCF-7細胞的染色效果圖

圖A是正常的MCF-7細胞，圖B是MCF-7細胞用Etoposide處理誘導的衰老組。實際染色效果會因樣品及實驗條件的不同而存在差異，本圖僅供參考。

本試劑盒僅染色衰老細胞，不會染色衰老前的細胞(presenescent cells)、靜止期細胞(quiescent cells)、永生細胞(immortal cells)或腫瘤細胞。

主要特點：本試劑盒經過多方面的優化，能兼容普通的細胞培養用多孔板、移液管等聚苯乙烯類材質耗材或容器的試劑盒。本試劑盒可以有效避免由于和多孔板、移液管等的不兼容導致的染色偏弱、染色效果不穩定等情況。通常同類試劑盒要求使用可高溫高壓滅菌的聚丙烯(polypropylene)材質的耗材、容器或玻璃容器進行溶液的配制，而不能使用普通的多孔板、移液管等聚苯乙烯(polystyrene)類材質的容器或耗材，否則可能會出現絮狀沉淀，影響實驗觀察。即使嚴格按照要求操作，也會在染色時間比較長的情況下，容易出現絮狀物沉淀(參考圖2)。本試劑盒經過多方面的優化，對耗材或容器的材質無特殊要求，可以兼容普通的多孔板和移液管等常用耗材和容器。而且配制的工作液不會產生沉淀或不溶物，使用更加便捷。

國際同類試劑盒  尚寶生物試劑盒

圖2. 本試劑盒優化前后的對比圖。優化前，X-Gal溶液直接接觸聚苯乙烯類材質的材料如移液管、多孔板等會產生明顯的腐蝕(A圖)，使用聚苯乙烯容器配制染色工作液后，在顯微鏡下觀察有異常的絮狀不溶物(C圖)；優化后，X-Gal溶液直接接觸聚苯乙烯類材質的材料觀察不到有任何異常情況(B圖)，使用聚苯乙烯容器配制染色工作液后，在顯微鏡下觀察也沒有任何異常情況(D圖)。

如果使用6孔板檢測，足夠測定100個樣品；使用24孔板測定，足夠測定400個樣品；使用96孔板測定，足夠測定1000個樣品。對于組織切片或組織塊，可以檢測的樣品數量視樣品的大小而定。對于普通切片的滴染足夠檢測100個樣品。

產品組成：

使用說明：

1. 對于貼壁細胞：

a. 對于6孔板中培養的細胞，吸除細胞培養液，用PBS或HBSS洗滌1次，加入1毫升β-半乳糖苷酶染色固定液，室溫固定15分鐘。對于其它類型的培養板，固定液及后續溶液的用量參照此比例進行操作。

b. 吸除細胞固定液，用PBS或HBSS洗滌細胞3次，每次3分鐘。

c. 吸除PBS或HBSS，每孔加入1毫升染色工作液。染色工作液的配制方法參考表1。

d. 37℃孵育過夜，可以用parafilm或保鮮膜封住6孔板防止蒸發。

注意：37℃孵育不能在二氧化碳培養箱中進行。

e. 普通光學顯微鏡下觀察。如不能及時觀察計數，可以去除染色工作液，加入2毫升PBS，4℃可以保存數天；或者加上封片液封片后，4℃可以保存較長時間。

2. 對于懸浮細胞：

a. 離心收集細胞至1.5ml離心管內，用PBS或HBSS洗滌1次，加入1毫升β-半乳糖苷酶染色固定液，室溫固定15分鐘。固定時可以在搖床上緩慢搖動，以避免細胞結成團塊。

b. 離心，吸除細胞固定液，用PBS或HBSS洗滌細胞3次，每次3分鐘。

c. 離心，吸除PBS或HBSS，每管加入0.5-1毫升染色工作液。染色工作液的配制方法參考表1。

d. 37℃孵育過夜。

注意：37℃孵育不能在二氧化碳培養箱中進行。

e. 取部分染色后的細胞，滴加到載玻片上或6孔板內，普通光學顯微鏡下觀察。如不能及時觀察計數，可以離心，去除染色工作液，然后加入1毫升PBS，4℃可以保存數天。如果離心，取細胞用于涂片，加上封片液封片后，4℃可以保存較長時間。

3. 對于組織切片：

a. 對于石蠟切片先按照常規方法進行脫蠟和水化處理。對于冷凍切片直接按照以下步驟進行。

b. 加入適當體積的β-半乳糖苷酶染色固定液，以充分蓋住組織為宜，室溫固定不少于15分鐘。

c. 用PBS浸泡洗滌組織3次，每次不少于5分鐘。

d. 吸除PBS，加入適當量的染色工作液。染色工作液的配制方法參考表1。

e. 37℃孵育過夜，可以用parafilm或保鮮膜封住防止蒸發。最好把整個切片浸泡在染色工作液中。

注意：37℃孵育不能在二氧化碳培養箱中進行。

f. 普通光學顯微鏡下觀察。如不能及時觀察，加上封片液封片后4℃可以保存較長時間。

注意事項：

1. 加入染色工作液后，由于溶液蒸發或其它未知原因等因素，可能會有結晶形成而影響觀察和拍攝照片，此時建議吸除染色工作液，加入適量70%乙醇進行洗滌，70%乙醇可在短時間內溶解結晶，待結晶溶解消失后再更換成PBS或生理鹽水。70%乙醇的洗滌對染色效果沒有任何影響。

2. 在石蠟包埋的過程中，溫度、固定液等因素可能會導致β-半乳糖苷酶失活，從而造成染色失敗，因此本試劑盒不建議用于石蠟切片的衰老檢測。如果一定要用于石蠟切片的檢測，建議自行對實驗條件進行一定的優化。

3. β-半乳糖苷酶染色固定液對人體有毒、有腐蝕性，操作時請特別小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。

4. X-Gal溶液在-20℃或4℃保存會凍結，室溫或37℃水浴2-5分鐘并適當搖動即可*融解。

5. 細胞衰老β-半乳糖苷酶染色反應依賴于特定的pH條件，不能在二氧化碳培養箱中進行染色反應。用于細胞培養的二氧化碳培養箱中較高濃度的二氧化碳會影響染色工作液的pH值，而導致染色失敗。

6. 試劑解凍后或使用前如果有沉淀，必須在使用前確保沉淀全部溶解。β-半乳糖苷酶染色液B剛從試劑盒中取出時，管底可能存在少量沉淀，屬正常現象，充分混勻或Vortex后，沉淀會全部溶解，并須確保在全部溶解后使用。配制染色工作液時，也可能有少量絮狀沉淀出現，震蕩混勻后就會*溶解，且須確保全部溶解后才能使用。

7. 使用96孔板等多孔板進行檢測時，如果孵育過夜容易產生所謂的“邊緣效應"(edge effect)，即多孔板四周的孔由于和外界最直接接觸，易受外界環境影響，其中明顯的是四周細胞培養孔的蒸發效應。邊緣效應會導致細胞生長不均勻、細胞分布不均一、培養液體積不一致、培養液中相關成分的濃度、pH值不一致。建議采取以下方法避免96孔板等多孔板的邊緣效應：避免孵育過長時間，以避免蒸發等帶來的邊緣效應；棄用邊緣孔并在棄用的邊緣孔中加入等量的水、PBS或其他適當溶液；在多孔板非孔的凹陷處加入適量的水或其他適當溶液；將整塊板放在濕盒中；使用防揮發蓋；在實驗設計時，實驗樣品最好進行隨機分配，不要將某一組樣品固定放在某個位置而引入可能的系統性誤差。

8. 需自備PBS或HBSS(Hanks Balanced Salt Solution)。

9. 本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。

10. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

保存條件：-20oC保存，一年有效。其中X-Gal溶液需避光保存。