D-PBS緩沖液（不含鈣鎂和酚紅）

產(chǎn)品貨號(hào)：T16705

產(chǎn)品規(guī)格：500ml

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

D-PBS，液體，不含鈣、鎂和酚紅。過(guò)濾除菌。PH值范圍 7.2-7.4。

產(chǎn)品組成：

操作說(shuō)明：

1. 懸浮細(xì)胞，2000rpm離心5min收集細(xì)胞對(duì)于貼壁細(xì)胞要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短(過(guò)長(zhǎng)細(xì)胞膜破碎，造成假陽(yáng)性，過(guò)短，細(xì)胞黏連影響檢測(cè))最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí)，吸除胰酶消化液，加入細(xì)胞培養(yǎng)液終止消化，2000rpm離心5min收集細(xì)胞。

2. 4℃預(yù)冷PBS洗滌細(xì)胞2次(2000rpmx5min)收集細(xì)胞2~5×10⁵。

3. 離心棄上清，加入500uL結(jié)合緩沖液，輕輕吹打重懸細(xì)胞。

4. 加入5uLAnnexin V-FITC輕輕吹打混勻，加入5uLPI輕輕吹打混勻室溫避光孵育5-15min。(PI染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高時(shí)間允許，可以在檢測(cè)前5分鐘加入PI。

5. 流式細(xì)胞儀檢測(cè)或熒光昂微鏡觀察。最好在1h內(nèi)檢測(cè)。

注意事項(xiàng)：

1. 盡管經(jīng)測(cè)試AnnexinV-FITC反復(fù)凍融5次對(duì)于其檢測(cè)效果無(wú)顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。

2. 如果有細(xì)菌或真菌污染，會(huì)嚴(yán)重影響檢測(cè)效果。

3. 染色后宜盡快檢測(cè)，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致凋廣或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。

4. 如果細(xì)胞收集過(guò)程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì)消化并降解AnnexinV-FITC，導(dǎo)致染色失敗。

5. 熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)，盡量縮短觀察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡量注意避光保存。

6. 用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，如果發(fā)現(xiàn)AnnexinV-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過(guò)多的PI假陽(yáng)性細(xì)胞，并且通過(guò)調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無(wú)法改善，可以用PBS將AnnexinV-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測(cè)，這樣通常可以有效減少假陽(yáng)性的壞死細(xì)胞.

7. 需自備PBS。

8. 本產(chǎn)品僅限干專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用干臨床診斷或治療，不得用干食品或藥品，不得存放干普通住宅內(nèi)。

9. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期：12個(gè)月有效。