斐林試劑（GB/T 5009.7-2016）

產品貨號：T16679

產品規格：2×100ml/2×500ml

產品簡介：

斐林試劑(Fehling's Reagent)又稱菲林試劑或裴林試劑，是德國化學家Hermann von Fehling 1849年所發明。斐林試劑與班氏試劑(Benedict's Reagent)相似，均是用來檢測還原糖的存在。其原理是與可溶性的還原性糖(葡萄糖、果糖和麥芽糖)在加熱的條件下，能夠生成磚紅色的氧化亞銅沉淀。

尚寶生物 斐林試劑(GB/T 5009.7-2016)是根據國家標準(食品中還原糖的測定)推薦的直接滴定的方法，主要由酒石酸鈉鉀、硫酸銅、亞甲藍、等組成。本產品的成分、原理和用途與斐林試劑(Fehling's Reagent)稍有區別。

斐林試劑(GB/T 5009.7-2016)主要用于含淀粉食品、酒料、碳酸飲料、肉制品、蜜餞等食品中還原糖的定量檢測；總糖的含量也可以測定，但需要提前水解后才能檢測，也可用于還原糖的定性試驗。該方法的檢測原理是試樣經去蛋白處理后，以亞甲藍為指示劑，在加熱條件下滴定標定過的斐林試劑（A液與B液等量混合生成的可溶性藍色的酒石酸鉀鈉銅絡合物，也稱作堿性酒石酸銅溶液），樣品中的還原糖將酒石酸鉀鈉銅中的二價銅還原成紅色的氧化亞銅沉淀，氧化亞銅沉淀又與反應生成可溶性的無色絡合物，當二價銅全部被還原，稍過量的還原糖把亞甲藍還原，溶液就由藍色變為無色，即為滴定終點，根據樣品液的消耗體積計算還原糖含量。本產品未經標定，需客戶自行標定。斐林試劑僅用于科研用途，不宜用于臨床檢測。

產品組成：

自備材料：

1. 試管、錐形瓶、容量瓶、玻璃珠

2. 水浴鍋、酒精燈等加熱裝置

3. 葡萄糖、果糖、轉化糖等還原糖標準（1mg/ml）

4. 50%鹽酸水溶液、氫氧化鈉溶液

5. 乙酸鋅溶液、溶液

6. 分析天平、酸式滴定管

操作說明：

1. Fehling's Reagent的標定：

25ml的酸式滴定管中加入還原糖標準溶液(1mg/ml)約15ml。向150ml錐形瓶中，依次加入Fehling's Reagent A 液和B液各5ml，再向其中加入10ml水和2~4粒玻璃珠。加熱錐形瓶，控制時間在2min內沸騰，保持沸騰以每2秒1 滴的速度滴加還原糖標準溶液，直到溶液藍色剛好褪去為終點，記錄消耗標準溶液的總體積，平行操作3次，取

平均值。計算每10ml Fehling's Reagent（A、B液各5ml）相當于還原糖的質量(mg)。

2. 試樣準備：

a 含淀粉食品：稱取粉碎或混勻后的試樣10~20g（精確到0.001g），置250ml容量瓶中，加水200ml，45℃水浴中加熱1h，并時時振搖，冷卻后加水至刻度，混勻，靜置，沉淀。吸取200.00ml上清液置于另一250ml容量瓶中，緩慢加入乙酸鋅溶液和溶液各5ml，加水至刻度，混勻靜置30min，用干燥濾紙過去，棄去初濾液，后續濾液備用。

b 酒料：稱取混勻后的試樣100g（精確到0.01g），置于蒸發皿上，用氫氧化鈉溶液中和至中性，在水浴上蒸發至原體積的1/4后，移入250容量瓶中，緩慢加入乙酸鋅溶液和溶液各5ml，加水至刻度，混勻靜置30min，用干燥濾紙過去，棄去初濾液，后續濾液備用。

c 碳酸飲料：稱取混勻后的試樣100g（精確到0.01g），置于蒸發皿上，在水浴上微微攪拌除去二氧化碳后，移入250容量瓶中，用水洗滌蒸發皿，并入容量瓶，加水至刻度，混勻后備用。

d 其他食品： 稱取粉碎后的固體試樣2.5~5g（精確到0.001g）或混勻后的液體試樣5~25g（精確到0.001g），置250ml容量瓶中，加水50ml，緩慢加入乙酸鋅溶液和溶液各5ml，加水至刻度，混勻靜置30min，用干燥濾紙過去，棄去初濾液，后續濾液備用。

3. 試樣溶液預測：

25ml的酸式滴定管中加入試樣溶液約15ml。向150ml錐形瓶中，依次加入Fehling's Reagent A液和B液各5ml，再向其中加入10ml水和2~4粒玻璃珠。加熱錐形瓶，控制時間在2min內沸騰，保持沸騰以先快后慢的速度滴加試樣溶液，待溶液顏色變淺時，以每2秒1滴的速度滴加，直到溶液藍色剛好褪去為終點，記錄消耗試樣溶液的總體積。

(注：試樣溶液中還原糖濃度過高時，應適當稀釋后再行測定。盡量使每次滴定消耗樣液的體積和標定斐林試劑所消耗的還原糖標準溶液的體積相近，約10ml。當濃度過低時，可直接加入10ml試樣溶液，不再加10ml水，再用還原糖標準溶液滴定至終點，記錄消耗的體積與標定時消耗的還原糖體積之差相當于10ml樣液中所含還原糖的質量。)

4. 試樣溶液測定：

25ml的酸式滴定管中加入試樣溶液約20ml。向150ml錐形瓶中，依次加入Fehling's Reagent A液和B液各5ml，再向其中加入10ml水和2~4粒玻璃珠。加熱錐形瓶，控制時間在2min內沸騰，保持沸騰以每2秒1滴的速度滴加試樣溶液，直到溶液藍色剛好褪去為終點，記錄消耗試樣溶液的總體積，平行操作3次，取平均值。

結果計算：

試樣中還原糖的含量（以某種還原糖計）按下邊公式計算：

X=m1×100/(m×F×V/250×1000)

當濃度過低時，試樣中還原糖的含量（以某種還原糖計）按下邊公式計算：

X=m2×100/(m×F×10/250×1000)

備注：X=試樣中還原糖的含量（以某種還原糖計）（g/100g）；

m1=斐林試劑（A、B液各半）相當于某種還原糖的質量(mg)；

m2=標定時體積與加入樣品后消耗的還原糖標準溶液體積之差相當于某種還原糖的質量(mg)；

m=試樣質量(g)；

F=樣品系數，含淀粉食品為0.8，其他為1；

V=測定時平均消耗試樣溶液體積（ml）；

10=樣液體積（ml）；

250=定容體積（ml）；

1000=單位換算系數。

還原糖含量≥10g /100g時，計算結果保留三位有效數字； 還原糖含量＜10g /100g時，計算結果保留兩位有效數字。

附：還原糖的定性試驗

1. 配制斐林試劑工作液：臨用前，取適量試劑(A)、試劑(B)等量混合即成，即配即用。

2. 向潔凈試管中加入1~2ml待測樣品。

3. 向該試管中加入1ml斐林試劑工作液，充分搖勻。

4. 將上述混合液置于沸水浴中，并持續1～3min。

5. 觀察試管內混合液顏色是否發生變化，其顏色變化順序應為淺藍色-棕色-磚紅色(沉淀)。

鑒定結果：

還原性糖(如核糖、葡萄糖、果糖等)     磚紅色沉淀

非還原性糖(蔗糖、淀粉等)             無顏色變化

注意事項：

1. 試樣溶液中還原糖濃度過高時，應適當稀釋后再行測定。盡量使每次滴定消耗樣液的體積和標定斐林試劑所消耗的還原糖標準溶液的體積相近。

2. 試樣溶液中還原糖濃度過低時，直接加入 10ml 試樣溶液，不再加10ml水，再用還原糖標準溶液滴定至終點，記錄消耗的體積與標定時消耗的還原糖體積之差相當于10ml樣液中所含還原糖的質量。

3. 也可按上述方法標定4~20ml斐林試劑(A、B液各半)來適應試樣中還原糖濃度的變化。

4. 斐林試劑的A、B液須分開儲存，臨用前按要求混合使用。

5. 斐林試劑B液呈強堿性，需小心操作。B液含有，可消除氧化亞銅沉淀對滴定終點的干擾。

6. 本品適用于各類食品中還原糖的測定，但在分析醬油等深色樣品時，會受色素干擾，滴定終點模糊不清，影響準確性。

7. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：6個月有效。