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供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100管/48樣 |
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貨號 | BA1012 | 應用領域 | 化工,生物產業 |
α-淀粉酶活性檢測試劑盒(微量法)
產品貨號:BA1012
產品規格:100管/48樣
產品簡介:
淀粉水解酶,包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-AL (EC 3.2.1.1)隨機催化淀粉中α-1,4-糖苷鍵水解,生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖,同時使淀粉的粘度降低,因此又稱為液化酶。淀粉水解酶催化淀粉水解生成還原糖,還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質,在540nm有吸收峰;通過測定540nm吸光度增加速率,計算淀粉酶活性。α-AL耐熱,但是β-淀粉酶可在70℃鈍化15min。因此粗酶液經過70℃鈍化15min,就只有α-AL能夠催化淀粉水解。
注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者 增加樣本量進行檢測。
產品內容:
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
試劑一 | 液體20mL×1瓶 | 室溫 |
試劑二 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃ |
標準品 | 粉劑×1支 | 2-8℃ |
溶液的配制:
1. 試劑一:若有黃色晶體析出,需加熱溶解后再用;
2. 試劑二:臨用前加入10mL蒸餾水,置于常溫水中并加熱至煮沸,期間不斷攪拌粉劑至溶解;
3. 標準品:10mg無水葡萄糖。臨用前加1mL蒸餾水,配成10mg/mL葡萄糖標準液。
需自備的儀器和用品:
酶標儀或可見分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、96孔板/微量玻璃比色皿、研缽/勻漿器和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣本處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)
稱取約0.1g樣本,加0.8mL蒸餾水勻漿;勻漿后在室溫下放置提取15min,每隔5min振蕩1次,使其充分提取;6000g,室溫離心10min,吸取上清液并且加蒸餾水定容至10mL,搖勻,即為淀粉酶原液。
二、測定步驟
1. 分光光度計預熱30min以上,調節波長到540nm,蒸餾水調零。
2. 將葡萄糖標準液用蒸餾水稀釋為0.5、0.4、0.3、0.2、0.1mg/mL的標準溶液。
3. 取250μL樣本沸水浴5min作為對照管使用。
4. 按照操作表依次加入各個試劑:
試劑(μL) | 對照管 | 測定管 | 標準管 | 空白管 |
α-淀粉酶原液 | 75(煮沸樣本) | 75 | - | - |
蒸餾水 | - | - | - | 75 |
標準溶液 | - | - | 75 | - |
70℃水浴15min左右,冷卻 | ||||
試劑二 | - | 75 | - | - |
在40℃恒溫水浴中準確保溫5min | ||||
試劑一 | 150 | 150 | 150 | 150 |
試劑二 | 75 | - | 75 | 75 |
混勻,沸水浴10min,取200μL至96孔板或微量比色皿中,540nm處讀取對照管、測定管、標準管、空白管的吸光度,分別記為A對照、A測定、A標準和A空白,計算ΔA測定=A測定-A對照,ΔA標準=A標準-A空白。
三、α-淀粉酶活性計算
1、 標準曲線的繪制:
以ΔA標準為y軸,以標準溶液濃度為x軸,繪制標準曲線,得到方程y=kx+b。將ΔA測定帶入方程得到x (mg/mL)。
2、 α-淀粉酶活性的計算:
(1)按照樣本質量計算
單位定義:每g組織每分鐘催化產生1mg還原糖定義為1個酶活力單位。
α-淀粉酶活性(U/g質量)=x×V樣÷(W×V樣÷V樣總)÷T=2×x÷W
(2)按照蛋白質濃度計算
單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1m 還原糖定義為1個酶活性單位。
α-淀粉酶活性(U/mg prot)= x×V樣÷(V樣×Cpr)÷T=0.2×x÷Cpr
V樣:加入反應體系中樣本體積,0.075mL;V樣總:提取液總體積,10mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;T:反應時間,5min。
注意事項:
測定的吸光值大于1.5時,可以對樣本進行適當稀釋后測定。若吸光值過小,可以濃縮淀粉酶稀釋液或者淀粉酶原液。
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