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50T 440元 999盒可售
更新時(shí)間:2022-07-25 16:21:23瀏覽次數(shù):407次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T |
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貨號(hào) | BA1806 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生 |
主要用途 | 僅供科研專用 |
酪氨酸酶活性檢測(cè)試劑盒(可見分光光度法)
產(chǎn)品貨號(hào):BA1806
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品簡介:
酪氨酸酶(tyrosinase:EC1.14.18.1)是一種單酚單加氧酶,是具有雙功能的含銅糖蛋白,廣泛存在于植物、 酵母和動(dòng)物組織中。酪氨酸酶是生物體合成黑色素的關(guān)鍵酶,也是引起果蔬酶促褐變的主要因素,同時(shí)也對(duì)昆蟲 的免疫及生長有重要影響。
酪氨酸酶催化L-多巴生成多巴色素,其在475nm下有特征吸收峰,進(jìn)而測(cè)定出酪氨酸酶的活性。
注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
產(chǎn)品內(nèi)容:
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體100mL×1瓶 | 2-8℃ |
試劑一 | 粉劑×3瓶 | 2-8℃ |
溶液的配制:
1. 試劑一:臨用前每瓶加入15mL提取液充分溶解待用,現(xiàn)配現(xiàn)用。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰、蒸餾水。
操作步驟:
一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))
1. 組織:稱取約0.1g組織,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。12000g,4℃離心20min,取上清,置冰上待測(cè)。
2. 細(xì)胞或細(xì)菌樣本的制備:先收集細(xì)胞或細(xì)菌樣本到離心管內(nèi),棄上清,按照每500萬細(xì)胞或細(xì)菌加入1mL提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率20%,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次)。12000g,4℃離心20min,取上清,置冰上待測(cè)。
3. 血清(漿):直接檢測(cè)。
二、測(cè)定操作
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min,波長調(diào)至475nm。蒸餾水調(diào)零。
2. 加樣表(在1mL玻璃比色皿中分別加入)
試劑名稱(μL) | 測(cè)定管 |
試劑一 | 900 |
樣本 | 100 |
充分混勻后立即測(cè)定10s時(shí)在475nm下的吸光度,記為A1,之后迅速將其放入37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其他物種)水浴或培養(yǎng)箱中3min。然后迅速拿出擦凈后測(cè)定190s時(shí)的吸光度,記為A2。計(jì)算ΔA=A2-A1。
三、酪氨酸酶酶活計(jì)算
1. 按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化生成1nmol多巴色素的酶量定義為一個(gè)酶活性單位。
酪氨酸酶(U/mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V反總×109÷(V樣×Cpr)÷T=90.09×ΔA÷Cpr
2. 按樣本質(zhì)量計(jì)算:
單位的定義:每g組織每分鐘催化生成1nmol多巴色素的酶量定義為一個(gè)酶活性單位。
酪氨酸酶(U/g 質(zhì)量)=ΔA÷(ε×d)×V反總×109÷(W÷V提取×V樣)÷T=90.09×ΔA÷W
3. 按細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)量計(jì)算:
單位的定義:每104個(gè)細(xì)胞或細(xì)菌每分鐘催化生成1nmol多巴色素的酶量定義為一個(gè)酶活性單位。
酪氨酸酶(U/104cell)=ΔA÷(ε×d)×V反總×109÷(500÷V提取×V樣)÷T=0.18×ΔA
4. 按血清(漿)體積計(jì)算:
單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘催化生成1nmol多巴色素的酶量定義為一個(gè)酶活性單位。
酪氨酸酶(U/mL)=ΔA÷(ε×d)×V反總×109÷V樣÷T=90.09×ΔA
V反總:反應(yīng)總體積,10-3L;ε:多巴色素的摩爾消光系數(shù):3.7×104L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;109: 單位換算系數(shù),1mol=109nmol;V樣:加入的樣本體積,0.1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;V提取:提取液體積,1mL;500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500萬;T:反應(yīng)時(shí)間,3min。
注意事項(xiàng):
1. 當(dāng)ΔA大于0.3時(shí),建議將樣本用提取液稀釋后測(cè)量;ΔA過小時(shí),建議增加酶促反應(yīng)時(shí)間(5min或10min)或增加加入的樣本體積來測(cè)定。
2. 試劑一溶解后易氧化。溶解后盡快用完。
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