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順烏頭酸酶活性檢測試劑盒(紫外分光光度法)

參  考  價:720
具體成交價以合同協議為準
  • 型號

    BA1882

  • 品牌

    其他品牌

  • 廠商性質

    生產商

  • 所在地

    上海市

規格

50管/48樣 720元 999瓶 可售

更新時間:2023-01-28 15:32:13瀏覽次數:222次

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供貨周期 現貨 規格 50管/48樣
貨號 BA1882 應用領域 化工,生物產業
主要用途 僅供科研專用
順烏頭酸酶(aconitase),三羧酸循環中的酶,催化檸檬酸轉變為異檸檬酸。檸檬酸本身不易氧化,在順烏頭酸酶作用下,通過脫水與加水反應,使羥基由β碳原子轉移到α碳原子上,生成易于脫氫氧化的異檸檬酸,為進一步的氧化脫羧反應作準備。

順烏頭酸酶(ACO)活性檢測試劑盒(紫外分光光度法)產品貨號:BA1882產品規格:50管/48樣產品簡介:順烏頭酸酶(aconitase),三羧酸循環中的酶,催化檸檬酸轉變為異檸檬酸。檸檬酸本身不易氧化,在順烏頭酸酶作用下,通過脫水與加水反應,使羥基由β碳原子轉移到α碳原子上,生成易于脫氫氧化的異檸檬酸,為進一步的氧化脫羧反應作準備。ACO催化檸檬酸轉化成異檸檬酸,異檸檬酸氧化脫羧將NAD+還原生成NADH,導致340nm處光吸收上升。注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。產品組成:試劑一:50mL×1瓶,-20℃保存;試劑二:10mL×1瓶,-20℃保存;試劑三:1mL×1支,-20℃保存;試劑四:液體60mL×1瓶,4℃保存;試劑五:液體5mL×1瓶,4℃保存;試劑六:粉劑×1支,-20℃保存;臨用前加3mL蒸餾水充分溶解;現配現用試劑七:粉劑×1支,4℃保存;臨用前加36mL試劑四充分溶解;工作液:臨用前在36mL試劑七中加入3mL蒸餾水、3mL試劑四、3mL試劑五、3mL試劑六充分混勻。需自備的儀器和用品:紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。樣本的前處理:組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:1. 稱取約0.1g組織或收集500萬細胞,加入1mL試劑一和10μL試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。2. 將勻漿轉入離心管內600g,4℃離心5min。3. 棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心10min。4. 上清液即胞漿提取物,可用于測定胞質順烏頭酸酶活性。5. 在步驟④的沉淀中加入200μL試劑二和2μL試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3秒,間隔10秒,重復30次),用于線粒體順烏頭酸酶活性測定。測定步驟:1. 分光光度計預熱30min以上,調節波長至340nm,蒸餾水調零。2. 樣本測定(1)將工作液,置于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴10min;現配現用;若分次用將工作液分裝后于-20℃保存,一星期內可用。(2)在1mL石英比色皿中加入100μL樣本900μL工作液,混勻,立即記錄340nm處20s時的吸光值A1和3min20s后的吸光值A2,計算ΔA=A2-A1。ACO活性計算:1. 用石英比色皿測定的計算公式如下(1)按樣本蛋白濃度計算單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1nmol的NADH定義為一個酶活性單位。ACO活性(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V樣)÷T=536×ΔA÷Cpr(2)按樣本鮮重計算單位的定義:每g組織每分鐘生成1nmol的NADH定義為一個酶活性單位。ACO(nmol/min/g鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W×V樣÷V樣總)÷T=108×ΔA÷W(3)按細菌或細胞密度計算單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1nmol的NADH定義為一個酶活性單位。ACO活性(nmol/min/104cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.722×ΔAV反總:反應體系總體積,0.001L;ε:NADH摩爾消光系數,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.1mL;V樣總:加入提取液體積,0.202mL;T:反應時間,3min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細菌或細胞總數,500萬。

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