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細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒（MTS）說(shuō)明書

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

   MTS 是一個(gè)基于光吸收檢測(cè)的均相非標(biāo)記細(xì)胞活力測(cè)定試劑。一步操作，可用于細(xì)胞增殖和毒性分析，方法 簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確。該試劑可被活細(xì)胞還原為具有高度水溶性的，可在490nm處檢測(cè)的甲臜染料，甲臜的生成量與活細(xì)胞的數(shù)量和活力成正比。

試劑的優(yōu)點(diǎn)：

1、 結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好:試劑不影響細(xì)胞活力，顯色產(chǎn)物直接溶解于培養(yǎng)液，直接測(cè)定OD值即可準(zhǔn)確反應(yīng)細(xì)胞 活力。

2、 操作省時(shí)簡(jiǎn)單:試劑即開即用，只需一步操作，即可檢測(cè)。無(wú)需額外清洗，加DMSO等步驟，重現(xiàn)性好。

3、 安全性好:不含放射性同位素和有機(jī)溶劑，使用安全。

4、 靈敏度高:靈敏度高于 MTT、XTT、CCK-8等方法。

使用方法:

*以下操作步驟針對(duì) 96 孔培養(yǎng)板培養(yǎng)每孔 100μl 細(xì)胞，若使用 96 孔外的培養(yǎng)板，試劑用量等比例增減。

1、 取出 MTS 試劑于室溫或 37℃溶解。

2、 于培養(yǎng)有 100μl 細(xì)胞/孔的 96 孔培養(yǎng)板中加入 10μl MTS 試劑。

3、 將96孔培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱，37℃孵育1～4 小時(shí)。

*如孵育后需立即檢測(cè)，請(qǐng)?zhí)敛襟E 4；如稍后檢測(cè)，每孔加入25μl的20%SDS溶液，避光保存，18 小時(shí)內(nèi)檢測(cè)。

4、 用酶標(biāo)儀于490nm處測(cè)定OD值。

結(jié)果分析： 將各測(cè)試孔的 OD 值減去對(duì)照孔或調(diào)零孔 OD 值。各平行孔的 OD 值取平均數(shù)。

細(xì)胞活力% = {(加藥細(xì)胞組 OD − 空白組 OD）/（對(duì)照細(xì)胞組 OD − 空白組 OD）}× *

注意事項(xiàng)：

1、 試劑加入后輕輕振搖培養(yǎng)板，使 MTS 試劑與培養(yǎng)基充分混勻。

2、 試劑加入后培養(yǎng)時(shí)間根據(jù)細(xì)胞種類的不同和每孔細(xì)胞數(shù)量的多少而異。對(duì)于貼壁細(xì)胞，加入 MTS 的培養(yǎng)時(shí)間 一般為1～4小時(shí)，但在培養(yǎng) 30 分鐘左右即可取出肉眼觀察顯色程度（根據(jù)細(xì)胞種類而定）。與貼壁細(xì)胞相比，懸浮細(xì)胞較難顯色。對(duì)于懸浮細(xì)胞，在加入MTS培養(yǎng)1～4小時(shí)后，可先從培養(yǎng)箱中取出，目測(cè)染色程度或用酶標(biāo)儀測(cè)定決定。白細(xì)胞較難顯色，因此需要較長(zhǎng)的MTS反應(yīng)時(shí)間或增加細(xì)胞數(shù)量（105個(gè)細(xì)胞/孔）。若顯色困難，可以將培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱，繼續(xù)培養(yǎng)數(shù)小時(shí)后再確定。注意：MTS的反應(yīng)時(shí)間以具體顯色的時(shí)間為準(zhǔn)。

3、 MTS試劑中的試劑會(huì)與還原劑反應(yīng)生成甲臜，如果實(shí)驗(yàn)中有還原劑，需要檢查背景的OD值，即在不含細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入藥物，然后加入MTS試劑在一定時(shí)間內(nèi)檢測(cè)，和不加藥物的培養(yǎng)基進(jìn)行比較（只加 MTS 試劑）， 如果OD值明顯偏高，則說(shuō)明有反應(yīng)。

4、 如果樣品為高渾濁度的細(xì)胞懸液，建議設(shè)定630nm～700nm作為參比波長(zhǎng)，扣除參比波長(zhǎng)的OD值即可。

5、 如果要測(cè)定細(xì)胞的具體數(shù)量，需要先做一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線。

6、 若測(cè)得OD值過(guò)高，可酌減鋪板細(xì)胞數(shù)或MTS試劑用量。

試劑包裝:

100 次：1ml×1 瓶；

500 次：5ml×l 瓶；

3,000 次：5ml×6 瓶；

5,000 次：5ml×10 瓶；

10,000 次：100ml×l 瓶。

貯藏條件:

   MTS 在避光 0～5℃的條件下存放一年，測(cè)定效果*不變。在-20℃的條件下可以貯存更久。反復(fù)凍融會(huì)增加背景值，經(jīng)常使用時(shí)請(qǐng)于 0～5℃條件下保存。

   本試劑僅供科研使用。