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酵母質粒提取試劑盒

產品貨號：26220

產品規格：50T/100T

產品簡介：

試劑盒采用酶法破碎酵母細胞壁和堿裂解法裂解酵母細胞來提取酵母質粒 DNA。所采用的酵母破壁酶能有 效地破壞酵母細胞壁，提高酵母質粒 DNA 的產量。吸附柱中采用的硅基質材料能高效、專一地吸附 DNA，可 大限度去除雜質蛋白質及細胞中其他有機化合物。使用本試劑盒提取的酵母質粒 DNA 可適用于各種常規的分子 生物學實驗，包括酶切、PCR、測序、連接和轉化等試驗。本試劑盒無需使用酚等有毒試劑，操作安全。

產品組成：

注意：使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標簽。YP1 在使用前先加入 RNaseA （將 試劑盒中提供的 RNaseA 全部加入），混勻，置于 2-8 ℃保存。如非指明，所有離心步驟均為使用臺式離心機在 室溫下離心。

操作步驟：

1. 取 1-5ml 酵母培養物（不超過 5×10 7 cells），12000rpm 離心 1min，盡量吸除上清（菌液較多時可以通過多 次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中）。

2. 酵母細胞壁的破除： A、酶法：向酵母菌體中加入 470ul 山梨醇 Buffer，充分懸浮菌體，加入 25ul 酵母破壁酶和 5ul 巰基還原劑， 充分混勻，30℃處理 1-2h，期間可顛倒離心管混勻數次。12000rpm 離心 1min，棄上清，收集沉淀。向沉淀 中加入 250ulYP1（請先檢查是否已加入 RNaseA），充分懸浮沉淀。注意：如果菌塊未*混勻，會影響裂 解導致質粒提取量和純度偏低。 B、玻璃珠法：向酵母菌體中加入 250ul YP1（請先檢查是否已加入 RNaseA），充分懸浮沉淀。加入 150-200ul 酸洗玻璃珠（自備），漩渦振蕩 10min。簡短離心使玻璃珠沉降到離心管底，吸取上清（如上清有所損失， 請用 YP1 補足至 250ul）于另一干凈離心管中。

3. 向離心管中加入 250ul YP2，溫和地上下翻轉 6-8 次使菌體充分裂解。注意：混勻一定要溫和，以免污染細 菌基因組 DNA，此時菌液應變得清亮粘稠，作用時間不要超過 5 min，以免質粒受到破壞。