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SDS-PAGE凝膠制備試劑盒
  • SDS-PAGE凝膠制備試劑盒
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貨物所在地:上海上海市

更新時間:2024-12-19 11:42:09

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本產品包括SDS-PAGE凝膠制備所需全套試劑,只需自備純水,即可制備高質量各種濃度的變性PAGE凝膠,方便、快捷。

SDS-PAGE 凝膠制備試劑盒

產品編號: P10312

產品規格:100-150 次

產品內容:   

  本產品所提供的 APS(過硫酸銨)為固體粉末,使用前加入超純水溶解即配制成 10%APS 溶液(1.5 g APS 加 15 ml 純水),將溶液分裝后置于-20℃保存,通常半年內有效。溶液在使用中可放置 4℃ 保存一個月。

產品簡介:

  本產品包括 SDS-PAGE 凝膠制備所需全套試劑,只需自備純水,即可制備高質量各種濃度的變性 PAGE 凝膠,方 便、快捷。

注意事項:

1. 10%APS 配制后分裝-20℃保存。APS 溶液不穩定,應盡量減少室溫存放時間,每次取用后立即放回冰箱,以防 失效;若發現凝膠聚合時間延長,應考慮更換使用-20 度保存的 10%APS。

2. PAGE 凝膠的凝聚速度與溫度以及 APS、TEMED 的用量密切相關;在其它條件不變的情況下,可通過改變 APSTEMED 的用量,控制 PAGE 凝膠的聚合速度,凝膠聚合過快不利于操作;附表中的 APS 及 TEMED 量可 供參考,應根據實操作情況做適當的調整。

3. 在凝膠配制過程中,尤其是液體混勻步驟,應盡量避免氣泡的產生。

4. 在分離膠上層加純水時要小心操作,加水時速度不能太快。

5. 丙烯酰胺具有神經毒性,操作時請穿著實驗服并佩戴一次性手套。

6. 本產品僅用于科研,不能用于人體實驗或人體治療。

操作步驟:

  根據目的蛋白分子量大小選擇合適的 PAGE 分離膠配制濃度,適用膠濃度請參考附表 II 灌制分離膠(各試劑使用量請參考附表 3)

1. 參照凝膠模具說明書,裝配好凝膠模具。  注:加入上層篩板有助于加樣時保持填料與樣品均勻接觸,是否加 入上層篩板可根據實際情況選擇。

2. 將不同體積的 30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Separating Gel Buffer、SDS Buffer 和純水在小燒杯或試管中混合。

3. 加入 10%APS 和 TEMED,輕輕攪拌使其混勻,避免產生氣泡。

4. 在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液(對于 mini-gel,凝膠液加至約距前玻璃板頂端 1.5 cm 或距梳齒約 0.5 cm 即 可),然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層 1 cm 的水層,使凝膠表面保持平整。

5. 靜置 30-60 分鐘,待分離膠和水層之間出現一個清晰的界面后,表面凝膠已聚合。

II 灌制濃縮膠(各試劑使用量請參考附表 2)

1. 去除覆蓋在分離膠上的水層。

2. 將不同體積的 30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Stacking Gel Buffer、SDS Buffer 和純水在一個小燒杯或試管中混 合。

3. 加入 10%APS 和 TEMED,輕輕攪拌使其混勻,避免產生氣泡。

4. 將濃縮膠溶液加至分離膠的上面,直至凝膠溶液到達前玻璃板的頂端。

5. 將梳子插入凝膠內,避免產生氣泡。

6. 靜置 10~20 分鐘,等待濃縮膠聚合。

7. 待凝膠聚合后,小心地拔出梳子,以免破壞加樣孔。

8. 進行常規電泳操作。

附表 1. SDS-PAGE 分離膠的濃度與適用待測蛋白檢測范圍

SDS-PAGE分離膠濃度 適用待測蛋白檢測范圍
8%膠30-200kD
10%膠20-130kD
12%膠12-80 kD

     

附表 2. 配制 5%SDS-PAGE 濃縮膠

附表 3. 配制 SDS-PAGE 分離膠 

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