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離心柱式血液基因組提取試劑盒
產(chǎn)品貨號:28103
產(chǎn)品規(guī)格:50 次/100 次/200 次
產(chǎn)品簡介:
本試劑盒采用高鹽法提取血液中的基因組 DNA,可大限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機化合物。提取 的基因組 DNA 的片段大,純度高,質(zhì)量穩(wěn)定可靠。
使用本試劑盒回收的 DNA 可適用于各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、文庫構(gòu)建、Southern 雜交等實驗。 自備試劑:無水乙醇。使用前 Buffer PW50 次加入 39ml 無水乙醇/100 次加入 77ml 無水乙醇/200 次加入 144ml 無水乙醇
包裝清單:
操作步驟:
以下步驟以提取 2mL 血液中基因組為例,具體實驗可根據(jù)血液量等比例減少。
1. 于離心管中加入 2mLBuffer A 和 2mL 預(yù)冷的超純水。上下顛倒 6-8 次,冰上孵育 2-3min。
2. 3500rpm 離心 15min,棄上清。
3. 加入 150μl Buffer B,劇烈渦旋 30-60s 至沉淀重新散裂,加入 5μl Proteinase K 溶液,充分顛倒混勻,56℃放 置 10 min,其間顛倒混勻數(shù)次,溶液應(yīng)變清亮(如溶液未*變清亮,請延長裂解時間至溶液清亮為止)。
注意:加入緩沖液 Buffer B 時可能會產(chǎn)生白色沉淀,一般 37℃放置時會消失,不會影響后續(xù)實驗。如溶液未變 清亮,說明細(xì)胞裂解不*,可能導(dǎo)致提取 DNA 量少和提取出的 DNA 不純,需等比例補加 Buffer B 及 Proteinase K。當(dāng)血液體積≤200μl 且沒有采用紅細(xì)胞裂解處理,或是樣本儲存條件不佳,水浴后顏色可能為深褐色,注意溶 液中沒有團塊等沉淀。
4. 加入 3 倍體積的 Buffer PG(約 0.45mL),渦旋充分混勻。
5. 柱平衡:向已裝入收集管(Collection Tubes)中的吸附柱(Spin Columns)中加入 200μl Buffer PS,12000 rpm 離心 1 分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
6. 將步驟 3 所得溶液加入到已裝入收集管的吸附柱中,室溫放置 2 分鐘,12000 rpm 離心 1 分鐘,倒掉收集管 中的廢液,將吸附柱放回收集管中(如步驟 3 所得溶液體積過大,可分次加入吸附柱中,12000 rpm 離心 1 分鐘,棄流穿液)。
7. 向吸附柱中加入 450 μl Buffer PW(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12000rpm 離心 1 分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱放回收集管中。
注意:如果純化的 DNA 用于鹽敏感的實驗(例如平末端連接或直接測序),建議加入 Buffer PW 靜置 2-5 分鐘 再離心。
8. 重復(fù)步驟 6。
9. 12000 rpm 離心 1 分鐘,倒掉收集管中的廢液。 注意:這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除,乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶促反應(yīng)(酶切、PCR 等)。
10. 將吸附柱放到一個新的 1.5 ml 離心管(自備)中,向吸附膜中間位置懸空滴加 50μlBuffer EB,室溫放置 2 分鐘。12000 rpm 離心 1 分鐘,收集 DNA 溶液。-20℃保存 DNA。
注意:
1) 洗脫液的 pH 值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液,應(yīng)保證其 pH 值在 7.0-8.5 之間(可以用 NaOH 將水的 pH 值調(diào)到此范圍)。
2) 為了提高基因組提取量,可將離心得到的溶液重新加到吸附柱中,室溫放置 2 分鐘,12000 rpm 離心 1 分鐘。
3) 洗脫體積不應(yīng)小于 30μl,體積過少會影響回收效率。
注意事項:
1. *使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明在 Buffer PW 中加入無水乙醇。
2. 若 Buffer B 中有沉淀,可在 37℃水浴中重新溶解,搖勻后使用。
3. 所有離心步驟均可室溫下進行。
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