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雙縮脲法蛋白質含量檢測試劑盒說明書

產品貨號：R22025

產品規格：100管/96樣

產品簡介：

  樣品可溶性蛋白質含量常常用于酶活性計算。此外，可溶性蛋白質含量也用于食品等質量分析。   強堿性溶液中，雙縮脲與 CuSO4形成紫色絡合物；紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質濃度成正比，而與 蛋白質分子量及氨基酸成分無關，故可用來測定蛋白質含量。該方法測定范圍為 1~10mg 蛋白質，適用于 蛋白質濃度高的樣品，尤其是動物材料。

自備儀器和用品:

1. 可見分光光度計/酶標儀

2. 移液器

3. 微量玻璃比色皿/96 孔板

4. 蒸餾水

試劑組成和配制：

試劑一：液體 20ml×1 瓶，4℃保存。

標準品：液體 1ml×1 支，5 mg/ml，-20℃保存。

樣品中可溶性蛋白質提取:

1. 液體樣品：澄清無色液體樣品可以直接測定。

2. 組織樣品：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液（自備，根據需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水））冰浴勻漿，10000rpm，4℃離 心 10min，取上清，即待測液。（動物樣品常常需要稀釋）

3. 細菌、真菌：按照細胞數量（10 4個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞 加入 1ml 提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然 后 8000rpm，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。

測定步驟:

1. 分光光度計/酶標儀預熱 30 min 以上，調節波長到 540 nm，蒸餾水調零。

2. 空白管：取 0.5 mlEP 管，加入 40ul蒸餾水，200ul試劑一，混勻后室溫靜置 15 min，取 200 ul于微量玻璃比色皿/96 孔板，540nm 比色，記為 A1 空白管。

3. 標準管：取 0.5 mlEP 管，加入 40ul標準液，200ul試劑一，混勻后室溫靜置 15 min，取 200 ul于微量玻璃比色皿/96 孔板，540nm 比色，記為 A2 標準管。

4. 測定管：取 0.5 mlEP 管，加入 40ul待測液，200ul試劑一，混勻后室溫靜置 15 min，取 200 ul于微量玻璃比色皿/96 孔板，540nm 比色，記為 A3 測定管。

樣品中蛋白質濃度計算：

1、按液體體積計算：

蛋白質（mg/ml）= C 標準管÷(A 標準管－A 空白管)×(A 測定管－A 空白管) =5÷(A 標準管－A 空白管)×(A 測定管－A 空白管)

2、按樣本鮮重計算：

蛋白質（mg/g 鮮重）= C 標準管÷(A 標準管－A 空白管)×(A 測定管－A 空白管) × V 樣總÷W             =5÷(A 標準管－A 空白管)×(A 測定管－A 空白管) ÷W

3、按細胞數量計算：

蛋白質（mg/10 4 cell）= C 標準管÷(A 標準管－A 空白管)×(A 測定管－A 空白管) × V 樣總                ÷500 =0.01÷(A 標準管－A 空白管)×(A 測定管－A 空白管)

C 標準管：5mg/ml；V 樣總：樣本總體積，1ml；W：樣本鮮重，g；500：細胞總數，500 萬。

注意事項：

1. 樣品蛋白濃度須在 1~10mg/ml 范圍內，低于 1mg/ml 不能用此法，高于 10mg/ml 須做相應稀釋。因 此測定前用 1~2 個樣做預實驗，確保蛋白濃度在 1~10mg/ml 范圍內。

2. 待測樣品蛋白提取可用生理鹽水、雙蒸水或不含蛋白的 PBS 提取。該法受硫酸銨、Tris 緩沖液干擾， 提取液中應不含這些物質；否則改用 BCA 蛋白質含量測定試劑盒。