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BCA 微量蛋白定量試劑盒說明書

產品貨號：34021

產品規格：1000 次

產品簡介：

  BCA 蛋白定量法是目前廣泛使用的蛋白定量方法之一。本產品是基于 BCA（Bicinchoninic Acid）法研 制而成，實現了對蛋白質進行快速、穩定、靈敏的濃度測定。其原理是在堿性環境下蛋白質 分子中的肽鏈 結構能與 Cu 2+絡合生成絡合物，同時將 Cu 2+還原成 Cu +。BCA 試劑可敏感特異地與 Cu +結合，形成穩定的有顏 色的復合物。在 562 nm 處有高的光吸收值，顏色的深淺與蛋白質濃度成正比，可根據吸收值的大小來測定 蛋白質的含量。本試劑盒專為低蛋白濃度樣品的蛋白定量而設計，可準確測定濃度為 0.2-100μg/ml 的蛋 白溶液，試劑盒的靈敏性高，平行性好，不同種蛋白之間的測量差異極低。每個試劑盒可以檢測 1000 個樣 品。

包裝清單：

產品名稱 包裝 儲存條件 試劑 A 50ml 4℃ 試劑 B 50ml 4℃ 試劑 C 5ml 4℃ 蛋白標準(BSA) 5mg/ml 1ml -20℃保存

操作步驟：

1.蛋白標準品的準備 取適量 5mg/ml 蛋白標準，用 PBS 稀釋至終濃度為 100μg/ml。例如取 10μl 5mg/ml 蛋白標準，加入 490μl PBS 即可配制成 100μg/ml 蛋白標準。蛋白樣品在什么溶液中，標準品也宜用什么溶液稀釋。但是 為了簡便起見，也可以用 0.9% NaCl 或 PBS 稀釋標準品。稀釋后的蛋白標準需-20ºC *保存。

2. 工作液配制

根據樣品數量，按 1 體積試劑 C 加 25 體積試劑 B，混勻后加 26 體積試劑 A，再次混勻（按照 C-B-A 的 順序加，切勿更改加樣順序）。配制適量 BCA 工作液，充分混勻。

3. 蛋白濃度測定

a. 將標準品按 0、5、10、20、40、60、80、100μl 加到 96 孔板的標準品孔中，加標準品稀 釋液 補足到 100μl，相當于標準品濃度分別為 0、5、10、20、40、60、80、100μg/ml。標準品濃度可根據實 際實驗需求更改。

b. 加適當體積樣品到 96 孔板的樣品孔中。如果樣品不足 100μl，需加標準品稀釋液補足 到 100μl。請注意記錄樣品體積。

c. 各孔加入 100μl 工作液，60ºC 放置 60 分鐘。

d. 用酶標儀測定 A562，或 540-595nm 之間的其他波長的吸光度。

e. 根據標準品濃度和 A562 值做出標準曲線，根據標準曲線和使用的樣品體積計算出樣品的蛋白 濃度。

常見問題：

1. 測定標準曲線時發現隨著標準品濃度的增加吸光度或顏色沒有明顯變化。 可能的原因是樣品中含有嚴重干擾 BCA 法測定蛋白濃度的物質。

2. 是否每次測定時都需要做標準曲線？ 建議每次測定時都做標準曲線。因為 BCA 法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深，并且顯色反應的 速度和溫度有關，所以除非準確控制顯色反應的時間和溫度，否則如需準確測定宜每次都做標準曲線。

注意事項：

  需酶標儀一臺，測定波長為 540-595nm 之間，*562nm 。需 96 孔板。如果沒有酶標儀，也可以使用 普通的分光光度計測定，但測定時，需根據比色皿的小檢測體積，適當加大 BCA 工作液的用量使不小于 小檢測體積，樣品和標準品的用量可相應按比例放大也可不變。使用分光光度計測定蛋白濃度時，每個 試劑盒可以測定的樣品數量可能會顯著減少。

  如發現樣品稀釋液或裂解液本身就有較高背景，請試用 Bradford 蛋白濃度測定試劑盒。

  EDTA 濃度必須小于 10mM，不兼容 EGTA。不適用 BCA 法時，請試用 Bradford 蛋白濃度測定試劑盒。

  本產品*于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。

  為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作